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苦荞麦胰蛋白酶抑制剂的分离纯化、基因克隆表达及其抗病虫害研究
中文名称: 苦荞麦胰蛋白酶抑制剂的分离纯化、基因克隆表达及其抗病虫害研究
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论文编号: 4143155收藏本论文】【我的收藏】【我要投稿
英文名称: Study on Isolation, Purification, Cloning, Expression of Trypsin Inhibitor of Tartary Buckwheat and Resistance to Diseases and Insect Pest
学位类型: 博士毕业论文
作者: 涉及隐私,隐去***  作者本人请参看权力声明>>
导师: 涉及隐私,隐去***
毕业学校: 涉及隐私,隐去***
专业: 生物化学与分子生物学
毕业年份: 涉及隐私,隐去***
关键字: 苦荞麦 胰蛋白酶抑制剂 纯化 克隆 植物病原真菌 甘蓝夜蛾
简介目录: 点击此处 免费索取本论文简介和目录>>
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论文摘要: 蛋白质性质的丝氨酸蛋白酶抑制剂广泛地分布于各种植物中,尤其是种子中.它们对植物病原真菌和食草昆(略)的抗性.本研究采用离子交换层析、亲和层析和离心超滤等分离纯化方法,从苦荞麦种子中分离出一种胰蛋白酶抑制剂((FtTI).FtTI在还原和非还原条件下电泳都表现出单一的条带,用SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳对纯化产物进行分析得出,FtTI的近似分子量大(略) kD.对其性质研究表明:FtTI对胰蛋白酶有较强的抑制作用,FtTI对胰蛋白酶的摩尔抑制比为1:1,迪克森作图法显示,该抑制剂属竞争性抑制类型,该抑(略)白酶的抑制常数为1.6 nM(以BApNA为底物).Edman降解法测序显示,FtTI的N末端氨基酸序列为V-G-K-Q-S-W-P-E-L-V,与甜荞(略)抑制剂N端序列有80%相似性,这表明FtTI与荞麦属的其它蛋白酶抑制剂具有很高的同源性.FtTI在20-80℃条件下具有较高的热稳定性,在80℃处理30 min后可保留84%左右的抑制活性.FtTI在强酸性和强碱环境下都较为稳定,FtTI的最(略).0,在pH3.0-10.0条件下,能保持90%以上的抑制活性.高温高压条件下,F...
Protein serine PIs are widely distributed in(omitted)specially in seeds. These are believed to f(omitted) spectrum defense mechanism against fungal pathogens and invertebrate pests. This study was aimed at investigating the purification and identification of serine protease inhibitors from tart(omitted)eat (Fagopyrum tataricum) seeds (FtTI) The FtTI was isolated by an(omitted)ge chromatography, affinity chromatography and centrifugal ultr(omitted)n. Under reducing and non-reducing condition, SDS-PAGE a...
目录:
中文摘要第4-6页
Abstract第6-8页
第1章 文献综述第11-25页
  ·植物病虫害的危害第11-13页
  ·蛋白酶抑制剂研究进展第13-16页
  ·荞麦蛋白酶抑制剂研究进展第16-17页
  ·植物基因的克隆和表达第17-20页
  ·荞麦胰蛋白酶抑制剂的研究现状第20-22页
  ·目前存在的问题和研究前景第22-23页
  ·本次研究的目的和意义第23-25页
第2章 苦荞胰蛋白酶抑制剂的分离纯化及性质分析第25-44页
  ·材料、试剂和仪器第25-26页
    ·材料第25页
    ·试剂和仪器第25-26页
  ·方法第26-33页
    ·苦荞麦胰蛋白酶抑制剂的分离纯化方案第26-27页
    ·FtTI的提取和纯化第27-29页
    ·胰蛋白酶抑制剂活性测定第29-30页
    ·FtTI的抑制动力学参数测定第30页
    ·聚丙烯酰胺凝胶电泳第30页
    ·蛋白质含量测定采用Bradford法第30页
    ·基质辅助飞行时间质谱分析第30-31页
    ·氨基酸组成分析及N-端氨基酸序列测定第31-32页
    ·FtTI的pH和热稳定性第32页
    ·FtTI的钝化第32-33页
  ·结果与分析第33-41页
    ·FtTI的纯化第33-35页
    ·FtTI的质谱分析第35页
    ·FtTI的抑制动力学参数分析第35-37页
    ·FtTI的氨基酸含量和N-端氨基酸序列测定第37-38页
    ·FtTI的pH和热稳定性第38-39页
    ·FtTI的钝化第39-41页
  ·讨论第41-44页
    ·FtTI的分离纯化第41-42页
    ·FtTI的性质分析第42-44页
第3章 苦荞胰蛋白酶抑制剂基因全长序列的克隆表达第44-74页
  ·材料、试剂和仪器第44-46页
    ·材料第44页
    ·试剂和仪器第44-45页
    ·培养基第45-46页
  ·实验方法第46-59页
    ·实验路线第46页
    ·苦荞麦胰蛋白酶抑制剂基因全长序列的克隆第46-54页
    ·FtTI基因全长序列的获得及其在毕赤酵母中的高效表达第54-58页
    ·GS115-FtTI表达条件的优化第58-59页
    ·GS115-FtTI表达产物的纯化第59页
    ·rFtTI的抑制活力及抑制常数的测定第59页
  ·结果与分析第59-70页
    ·苦荞麦DNA和RNA的提取第59-60页
    ·FtTI基因保守区的克隆第60-61页
    ·FtTI基因5'末端序列的克隆第61-62页
    ·FtTI基因3'末端序列的克隆第62页
    ·苦荞麦胰蛋白酶抑制剂基因全长序列的拼接第62-65页
    ·苦荞麦胰蛋白酶抑制剂基因全长序列的获得第65-66页
    ·pPIC9k-FtTI在毕赤酵母中的高效表达第66页
    ·GS115-FtTIⅦ表达条件的优化第66-69页
    ·rFtTI的纯化及抑制活性检测第69-70页
  ·讨论第70-74页
    ·荞麦胰蛋白酶抑制剂基因研究现状第70-71页
    ·引物设计第71页
    ·重组表达载体的构建第71-72页
    ·毕赤酵母表达研究第72页
    ·表达条件优化研究第72-73页
    ·重组苦荞麦胰蛋白酶抑制剂诱导表达、纯化和鉴定第73-74页
第4章 苦荞胰蛋白酶抑制剂的抗病虫害研究第74-87页
  ·材料、试剂和仪器第74-76页
    ·材料第74-75页
    ·试剂和仪器第75页
    ·培养基第75-76页
  ·实验方法第76-77页
    ·抑制植物病原真菌实验第76-77页
    ·FtTI的抗虫性研究第77页
  ·结果与分析第77-85页
    ·FtTI的抗病原真菌效果第77-81页
    ·FtTI纯化产物的抗虫效果第81-85页
  ·讨论第85-87页
    ·FtTI的抗植物病原真菌实验第85页
    ·苦荞麦胰蛋白酶抑制剂的抗虫性研究第85-86页
    ·苦荞麦胰蛋白酶抑制剂应用前景第86-87页
小结第87-89页
  本论文主要的创新点第87页
  研究展望第87-89页
参考文献第89-93页
致谢第93-94页
1.申请专利第94页
2.发表论文第94页
3.在审论文第94-95页
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