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攀西地区药用植物内生及根际放线菌的多样性与抗菌活性研究
中文名称: 攀西地区药用植物内生及根际放线菌的多样性与抗菌活性研究
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论文编号: 4143146收藏本论文】【我的收藏】【我要投稿
英文名称: Study on Diversity and Antibiotic Activity of Endophytic and Rhizospheric Actinomycetes from Medicinal Plants in Panxi Region
学位类型: 博士毕业论文
作者: 涉及隐私,隐去***  作者本人请参看权力声明>>
导师: 涉及隐私,隐去***
毕业学校: 涉及隐私,隐去***
专业: 生物化学与分子生物学
毕业年份: 涉及隐私,隐去***
关键字: 攀西地区 药用植物 内生放线菌 多样性 抗菌活性 PKS-NRPS根际放线菌 长穗兔儿风 PCR-DGGE 16S rDNA文库
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论文摘要: 药用植物蕴涵着种类繁多的生物活性物质,为医药、化妆及香料工业提供了丰富的原材料.而(略)物内部的微生物与药用植物在长期进化的过程中,由于二者间不断地进行物质、能量以及遗传信息的交换,内生菌与药用植物最终形成相对稳定的生态关系,使存在于药用植物中的微生物能产生与宿主植物次生代谢产物相同或类似的化合物.攀西地区独特的地理环境(略)适宜多种药用植物生长,药用植物资源有2500种之多,为筛选具有不同生物学活性的新颖化合物提供了丰富的资源. 本研究以攀西地区药用植物为研究材料,选择不同的分离培养基,从26种药用植物中分离出内生放线菌560株,根据(略)特征,将其分为22个群,并从中筛选出60株代表菌株进行多样性和抗菌活性分析.以HaeⅢ、RsaⅠ两个限制内切酶进行16S rDNA-RFLP分析,(略)果,选取14株代表菌株测定16S rDNA序列,结果表明从攀西地区药用植物中分离得到的放线菌包括了6个属,分别(略)Streptomyces)、厄氏菌属(Oerskovia)、野野村菌属(Nonomuraea)、小单孢菌属(Micromonospora)、原小单孢菌属(Promicrom...
Traditional Chinese medicina(omitted)re sources of biologically active compounds, providing raw material for ph(omitted)al, cosmetic and fragrance industries. The endophytes of medicinal plants participate (omitted)ical pathways and produce analogous or novel bioactive compounds. Panxi region in South-west Sichuan(omitted)with its unique geographical and climatological characteristics is a habitat of a great variety of medicinal plants. In this study,560 endophytic actinomycetes we(omitted)d from 26 me...
目录:
摘要第11-13页
Abstract第13-14页
第一部分 攀西地区药用植物内生放线菌的分离,鉴定,抗菌活性及多样性研究第15-88页
  第1章 文献综述第15-40页
    ·植物内生菌第15-22页
      ·植物内生菌的定义第15-16页
      ·植物内生菌的分布及起源第16-18页
      ·植物内生菌生物多样性第18-19页
      ·植物内生菌与宿主的关系及作用第19-22页
        ·生防作用第19页
        ·促生作用第19-20页
        ·抗逆作用第20-22页
    ·植物内生放线菌的研究进展第22-32页
      ·放线菌简介第22-23页
      ·放线菌分类的研究概况第23-25页
        ·经典分类第24页
        ·化学分类第24页
        ·分子分类第24页
        ·多相分类第24-25页
      ·植物内生放线菌的分离方法第25-30页
        ·样品的采集第26-27页
        ·表面消毒第27-29页
        ·样品的处理第29页
        ·表面消毒有效性检测第29-30页
        ·植物内生放线菌分离培养基第30页
      ·药用植物内生放线菌及其天然产物的多样性第30-32页
    ·放线菌功能基因简介第32-35页
      ·PKSⅠ第33-34页
      ·PKSⅡ第34-35页
      ·NRPS第35页
      ·药用植物内生放线菌功能基因研究现状第35页
    ·攀西地区概况第35-38页
      ·地形地貌第36页
      ·水系第36-37页
      ·气候第37页
      ·植被第37-38页
      ·土壤第38页
    ·攀西地区药用植物内生放线菌资源研究的目的与意义第38-40页
  第2章 药用植物内生放线菌的分离第40-50页
    ·实验材料第40-42页
      ·样品采集第40-42页
    ·实验方法第42-44页
      ·样品保存第42页
      ·样品的预处理第42页
      ·表面消毒第42-43页
      ·表面消毒有效检测第43页
      ·内生放线菌的分离第43页
      ·分离培养基第43-44页
    ·结果与分析第44-48页
      ·表面消毒有效性检测第44页
      ·药用植物内生菌的分离第44-48页
    ·讨论第48-50页
  第3章 药用植物内生菌多样性分析第50-66页
    ·实验材料第50页
      ·菌株第50页
      ·试剂第50页
    ·实验方法第50-54页
      ·形态及培养特征观察第51页
      ·药用植物内生放线菌基因组DNA提取第51页
      ·内生放线菌16S rDNA的PCR扩增第51-52页
      ·放线菌16S rDNA限制性酶切多态的分析(ARDRA)第52页
      ·S rDNA产物纯化与测序分析第52-53页
      ·药用植物内生放线菌的分子鉴定及系统发育树的构建第53页
      ·GenBank序列号第53-54页
    ·结果与分析第54-63页
      ·内生放线菌形态观察第54-56页
      ·内生放线菌基因组DNA的提取第56-57页
      ·PCR扩增植物内生放线菌16S rDNA第57页
      ·S rDNA PCR-RFLP分析第57-63页
    ·讨论第63-66页
  第4章 药用植物内生放线菌抗菌活性及功能基因的研究第66-88页
    ·药用植物内生放线菌抗菌活性的筛选第66-68页
      ·实验材料第66-68页
        ·抗菌活性筛选待测菌株第66页
        ·培养基第66-67页
        ·拮抗筛选指示菌第67-68页
        ·抑菌活性检测第68页
    ·药用植物内生菌PKS Ⅰ、PKS Ⅱ及NRPS基因的筛选第68-74页
      ·实验材料第68-69页
        ·菌株第68页
        ·引物第68-69页
        ·试剂第69页
      ·实验方法第69-74页
        ·药用植物内生放线菌总DNA提取第69-70页
        ·PKS Ⅰ、PKS Ⅱ及NRPS基因的扩增第70页
        ·克隆子检测第70-71页
        ·PCR产物凝胶电泳检测第71页
        ·PCR产物的回收与纯化第71页
        ·回收片段酶连和转化第71页
        ·制备感受态细胞第71-72页
        ·转化第72-73页
        ·阳性克隆子检测第73页
        ·序列的比对与分析第73页
        ·GenBank序列号第73-74页
    ·结果与分析第74-86页
      ·药用植物内生放线菌抗菌活性筛选第74页
      ·药用植物内生放线菌PKSⅠ、PKSⅡ及NRPS基因的分子筛选第74-81页
      ·药用植物内生放线菌PKSⅠ、PKSⅡ及NRPS基因多样性分析第81-86页
    ·结论第86-88页
第二部分 攀西地区药用植物根际放线菌的分离,鉴定,抗菌活性及多样性研究第88-139页
  第1章 文献综述第88-102页
    ·根际微生物第88-94页
      ·根际微生物的分布第88-89页
      ·根际微生物种类的多样性第89-91页
      ·根际微生物功能的多样性第91-94页
        ·固氮作用第91-92页
        ·促生作用第92-94页
        ·抑菌作用第94页
    ·根际微生物多样性的研究方法第94-98页
      ·纯培养方法对微生物多样性的研究第95页
      ·免培养方法对微生物多样性的研究第95-98页
        ·环境样品总DNA的提取第95-96页
        ·PCR扩增第96页
        ·变性梯度凝胶电脉第96页
        ·S rRNA克隆文库分析第96-97页
        ·单链构象多态第97页
        ·末端限制性片段长度多态第97-98页
        ·荧光原位杂交第98页
        ·磷脂脂肪酸谱图分析第98页
    ·影响根际微生物分布的因素第98-99页
      ·植物第98-99页
      ·土壤动物群第99页
      ·非生物因素第99页
    ·药用植物根际放线菌研究的现状第99-100页
    ·本研究的目的和意义第100-102页
  第2章 药用植物根际可培养放线菌的分离、抗菌活性及多样性研究第102-123页
    ·实验材料第102-103页
      ·样品采集第102-103页
    ·实验方法第103-105页
      ·土壤理化性质分析第103页
      ·样品预处理第103-104页
      ·根际放线菌分离培养基第104页
      ·药用植物根际放线菌鉴定和多样性研究第104-105页
      ·药用植物根际放线菌抗菌活性筛选第105页
    ·实验结果与分析第105-120页
      ·土壤理化性质的测定结果第105-106页
      ·药用植物根际放线菌的分离第106-111页
        ·不同培养基分离结果第106-109页
        ·不同预处理对分离结果的影响第109-110页
        ·不同培养基分离放线菌种类情况第110-111页
      ·放线菌形态观察第111-112页
      ·药用植物根际放线菌多样性分析第112-116页
      ·药用植物根际放线菌抗菌活性第116-120页
    ·讨论第120-123页
  第3章 药用植物根际不可培养放线菌的多性样研究第123-139页
    ·实验材料第123-124页
      ·土样样品第123页
      ·试剂第123-124页
    ·实验方法第124-129页
      ·土壤样品总DNA提取第124页
      ·PCR-DGGE分析第124-127页
        ·PCR扩增第124-126页
        ·PCR产物凝胶电泳检测第126页
        ·DGGE分析第126-127页
        ·图像和多样性分析第127页
      ·药用植物根际放线菌16S rDNA基因克隆文库的构建第127-129页
        ·PCR扩增第127页
        ·PCR产物凝胶电泳检测第127-128页
        ·文库克隆子的ARDRA分析第128页
        ·克隆序列测序与分析第128页
        ·文库系统发育分析第128页
        ·文库多样性指数分析第128-129页
      ·GenBank序列号第129页
    ·结果与分析第129-137页
      ·药用植物根际土壤总DNA的提取第129页
      ·PCR-DGGE检测第129-132页
        ·PCR扩增第129-130页
        ·DGGE条带及多样性分析第130-132页
      ·药用植物根际放线菌16S rDNA多样性及系统发育分析第132-137页
        ·药用植物根际放线菌16S rDNA基因扩增第132-133页
        ·药用植物根际放线菌16S rDNA克隆文库的构建第133-134页
        ·药用植物根际放线菌16S rDNA多样性指数分析第134-135页
        ·药用植物根际放线菌16S rDNA系统发育分析第135-137页
    ·讨论第137-139页
参考文献第139-157页
附录第157-162页
致谢第162-164页
攻读博士学位期间发表文章情况第164页
获奖情况第164页
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