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黑暗链霉菌aprD3和aprD4基因的研究及卡那霉素B高产菌株的构建
中文名称: 黑暗链霉菌aprD3和aprD4基因的研究及卡那霉素B高产菌株的构建
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论文编号: 4143144收藏本论文】【我的收藏】【我要投稿
英文名称: Characterization of aprD3, aprD4 Gene from Streptomyces Tenebrarius and Construction of Kanamycin B Overproducing Strain
学位类型: 博士毕业论文
作者: 涉及隐私,隐去***  作者本人请参看权力声明>>
导师: 涉及隐私,隐去***
毕业学校: 涉及隐私,隐去***
专业: 微生物与生化药学
毕业年份: 涉及隐私,隐去***
关键字: 黑暗链霉菌 基因阻断 卡那霉素B 氨甲酰妥布霉素 安普霉素
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论文摘要: 黑暗链霉菌主要产生(略)素、氨甲酰卡那霉素B和安普霉素三种抗生素,氨甲酰妥(略)酰卡那霉素B是4,6取代(略)胺类氨基糖苷抗生素,而安普霉素是4取代2-脱氧链霉胺类抗生素,且结构中有一独特的八碳糖.氨甲酰妥布霉素和氨甲酰卡那霉素B结构非常相似,差别只在氨甲酰卡那霉素B的C-3’位为羟基而氨甲酰妥布霉素C-3’位为氢,(略)与它们结构有较大差异,但其C-3’位也为氢.推测氨甲酰妥布霉素和氨甲酰卡那霉素B为同一生物合成途径合成,其生物合成基因簇为妥布霉素生物合成基因簇,而安普霉素有其独立的生物合成途径,妥布霉素生物合成基因簇和安普霉素生物合成基因簇均已经被克隆.由于氨甲酰妥布霉素和安普霉素结构中都有C-3’位脱氧结构,且前体的对应位置为羟基,所以推测它们的生物合成途径中有C-3’位脱氧这一过程.因此,通过实验证实氨甲酰妥布霉素和安普霉素生物合成中C-3’脱氧有关的基因不仅可以为2-脱氧链霉胺类氨基(略)脱氧机制研究打下基础,而且可以在此基础上通过基因工程的方法构建只产目标产物的组份优化的菌株.对已经报道的氨基糖苷类抗生素合成基因进行生物信息学分析,推测安普霉素生物合成基因簇中的apr...
Streptomyces tenebrarius produce carbamoyltobramycin, carbamoylkanamycin B and apramyc(omitted)oyltobr(omitted) carbamoylkanamycin B are 4,6 substituted 2-DOS containing aminoglycosides. Whereas apramycin is 4 sub(omitted)and has a unique octose. Carbamoyltobramycin and carbamoylkanamycin B are similar (omitted)re, and they were biosynthesized by the same pathway. Their biosynthetic gene cluster has been cloned and named a(omitted)in biosynthetic gene cluster. Apramycin has an independently biosyntheti...
目录:
摘要第11-13页
Abstract第13-14页
第1章 前言第15-36页
  ·-DOS类氨基糖苷类抗生素的药理学性质第16-17页
  ·-DOS类氨基糖苷类抗生素应用中出现的问题第17-18页
    ·耐药性问题第17-18页
    ·毒副作用第18页
  ·-DOS类氨基糖苷类抗生素的化学结构改造第18-20页
    ·C-3’,4’脱氧修饰第18-19页
    ·-N衍生化修饰第19-20页
  ·氨基糖苷类抗生素生物合成的研究进展第20-30页
    ·共同生物中间体的合成第20-24页
    ·,5-双取代2-DOS氨基糖苷类的生物合成第24-26页
    ·妥布霉素的生物合成第26-27页
    ·卡那霉素的生物合成第27-28页
    ·庆大霉素的生物合成第28-30页
    ·安普霉素的生物合成第30页
  ·氨基糖苷类抗生素生物合成基因功能的研究方法第30-32页
    ·基因阻断第30-32页
    ·体外表达第32页
  ·研究妥布霉素生物合成基因簇中aprD3和aprD4基因的立题意义第32-36页
    ·研究的理论意义第32-34页
    ·研究的应用价值第34-36页
第2章 材料和方法第36-47页
  ·试验材料第36-40页
    ·菌种第36页
    ·质粒第36页
    ·试剂第36-38页
    ·引物第38页
    ·缓冲液第38-39页
    ·培养基第39-40页
    ·仪器第40页
  ·实验方法第40-47页
    ·大肠杆菌质粒DNA小量提取第40-41页
    ·链霉菌总DNA的小量提取第41页
    ·链霉菌总DNA的大量提取第41页
    ·大肠杆菌DH 5α感受态细胞的制备第41-42页
    ·DNA酶切与去磷酸化第42页
    ·DNA连接第42页
    ·DNA转化大肠杆菌第42页
    ·DNA电泳和片断回收第42页
    ·PCR反应第42-43页
    ·接合转移试验第43页
    ·Southem blot杂交第43-45页
    ·黑暗链霉菌发酵培养及产物检测第45页
    ·发酵产物的高效液相检测第45页
    ·黑暗链霉菌发酵产物生物效价的测定第45页
    ·氨甲酰卡那霉素B产量的HPLC测定第45-46页
    ·发酵产物的分离纯化第46页
    ·基因序列及蛋白序列功能分析第46页
    ·进化树分析第46-47页
第3章 aprD3阻断变株的获得及产物分析第47-58页
  ·aprD3阻断变株的获得第47-51页
    ·aprD3基因阻断质粒的构建第47-49页
    ·接合转移实验第49页
    ·单交换菌株的筛选第49页
    ·双交换菌株的筛选第49-51页
  ·aprD3阻断变株发酵产物的分离及结构鉴定第51-54页
  ·aprD3全基因删除菌株的构建及产物分析第54-55页
  ·讨论第55-58页
第4章 aprD4阻断变株的获得及产物分析第58-68页
  ·阻断载体的构建第58-61页
    ·pNXP8的构建第58-59页
    ·aprD4阻断载体的构建第59-61页
  ·阻断变株产物结构分离纯化及结构鉴定第61-63页
  ·aprD3及aprD4双阻断基因菌株的构建及产物分析第63-66页
  ·讨论第66-68页
第5章 卡那霉素B高产菌株的构建第68-79页
  ·氨甲酰卡那霉素B高产菌株的构建第68-73页
  ·卡那霉素B高产菌株的构建第73-75页
  ·讨论第75-79页
第6章 全文结论第79-80页
参考文献第80-86页
学位期间发表论文第86-87页
致谢第87-88页
附录第88-96页
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