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嗜酸氧化亚铁硫杆菌铁氧还蛋白还原酶的表达纯化及酶活测定
中文名称: 嗜酸氧化亚铁硫杆菌铁氧还蛋白还原酶的表达纯化及酶活测定
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论文编号: 4143072收藏本论文】【我的收藏】【我要投稿
英文名称: Expression, Purification and Activity of Ferredoxin NADP~+ Reductase from Acidithiobacillus Ferrooxidans
学位类型: 硕士毕业论文
作者: 涉及隐私,隐去***  作者本人请参看权力声明>>
导师: 涉及隐私,隐去***
毕业学校: 涉及隐私,隐去***
专业: 生物工程
毕业年份: 涉及隐私,隐去***
关键字: 嗜酸氧化亚铁硫杆菌 铁氧还蛋白还原酶 酶动力学 结构模拟
简介目录: 点击此处 免费索取本论文简介和目录>>
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论文摘要: 铁氧还蛋白酶还原酶(ferredoxin NADP+ reducta(略)R)是一种广泛存在于动物、植物、真菌和微生物中的蛋白质,同时可以结合黄素腺嘌呤二核甘酸(flavin adenine dinucleotide, FAD)和还原型烟酰腺嘌呤二核苷磷酸(NADPH),(略)催化NADP(H)和铁氧还蛋白(ferredoxin)之间的反应,在电子传递链中具有相当重要的作用. 本论文首先从(略)ooxidans菌中克隆出铁氧还蛋白还原酶的基因,利用T4连接酶与含T7启动子的载体PLM I连接构建成一个新的质粒.T7启动子是来自T7噬菌体的启动子,具有高度的特异性,只有T7RNA(略)其启动,可以使克隆化基因独自得到表达.然后使用大肠杆菌DH5α作为宿主,从而获得大量稳定的,高纯度的重组质粒,最后使用大肠杆菌BL21作为宿主,BL21含有lacUV5启动子,可以编码T7RNA聚合酶,并且它缺失表达ATP依赖型蛋白分解酶(La)的1on基因,这使它失去了外源的异型蛋白质具有特异性的分解作用,所以可以很好的表达克隆体目的蛋白(略)达条件下表达蛋白,并通过一步亲和纯化法分离出带有组...
Ferredoxin(flavodoxin)-NADP(H) reductase(FNR) is a ubiquitous f(omitted)s that deliver NADPH or low poten(omitted)lectron donors(ferredoxin,flavodoxin,asrenodoxin) to redox based metabolisms in plastids,mitochondria and bacteria. The gene of fe(omitted)ADP+ reductase(FNR) cloned from A. ferrooxidans ATCC23270 was ligated with PLM I which contains a T7 promoter by T4(omitted) promoter is a pr(omitted)es from T7 bacteriophage which has high specificity.Only T7 RNA ploymerase can makes it works so that...
目录:
摘要第4-5页
ABSTRACT第5页
目录第6-8页
第1章 绪论第8-23页
  ·生物冶金(Bioleaching)第8-10页
    ·研究进展第8-9页
    ·面临的主要挑战第9页
    ·A.ferrooxidans菌及其铁氧化系统介绍第9-10页
  ·铁氧还蛋白还原酶(Ferredoxin-NADP+reductase,FNR)第10-22页
    ·铁氧还蛋白还原酶简介第10-11页
    ·FNR的结构第11-13页
    ·FNR的系统分类第13-21页
    ·FNR的催化机理第21-22页
  ·课题的研究目的与研究内容第22-23页
    ·依据和目的第22页
    ·论文的主要研究内容第22页
    ·论文课题受资助情况第22-23页
第2章 实验方法第23-35页
  ·实验的材料第23-28页
    ·实验所用菌种第23页
    ·实验所用培养基第23-24页
    ·基因组提取试剂第24页
    ·质粒提取试剂第24页
    ·琼脂糖凝胶电泳第24-25页
    ·快速胶回收纯化试剂第25页
    ·不连续体系SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳第25-26页
    ·SDS-PAGE胶保存试剂及装置第26-27页
    ·亲和纯化试剂第27-28页
    ·实验仪器与设备第28页
  ·实验方法第28-33页
    ·PCR扩增第28-29页
    ·酶切PCR产物及载体pLM 1第29页
    ·载体和目的片段的连接反应第29页
    ·重组质粒的转化第29页
    ·阳性克隆子的筛选第29-30页
    ·重组质粒的转化第30页
    ·蛋白质的表达条件第30-31页
    ·SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)第31-32页
    ·蛋白质的纯化第32-33页
  ·测试分析方法第33-35页
    ·SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)第33页
    ·紫外分光光度计扫描(UV Scanning)第33-34页
    ·分子结构模型图的模拟(Molecular structure modeling)第34-35页
第3章 铁氧还蛋白还原酶的表达纯化第35-41页
  ·FNR基因的克隆第35-37页
    ·FNR基因的克隆第35-36页
    ·阳性克隆的筛选第36-37页
  ·FNR的表达第37-40页
    ·FNR表达条件的确定第37-38页
    ·FNR大规模的表达第38页
    ·SDS-PAGE分析铁氧还蛋白还原酶第38-39页
    ·UV/Vis分析FNR第39-40页
  ·本章小结第40-41页
第4章 分子结构模拟第41-44页
  ·序列分析第41页
  ·结构模拟第41-43页
  ·本章小结第43-44页
第5章 活性测定第44-48页
  ·测活方法第44-47页
  ·测活结果第47页
  ·本章小结第47-48页
第6章 结论第48-49页
参考文献第49-58页
致谢第58-59页
研究成果第59页
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