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三疣梭子蟹LGBP基因的克隆与表达研究
中文名称: 三疣梭子蟹LGBP基因的克隆与表达研究
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论文编号: 4142883收藏本论文】【我的收藏】【我要投稿
英文名称: Cloning and Expression Analysis of a Lipopolysaccharide -and Beta-1,3-glucan-binding Protein (LGBP) in Portunus Trituberculatus
学位类型: 硕士毕业论文
作者: 涉及隐私,隐去***  作者本人请参看权力声明>>
导师: 涉及隐私,隐去***
毕业学校: 涉及隐私,隐去***
专业: 海洋生物学
毕业年份: 涉及隐私,隐去***
关键字: 三疣梭子蟹 LGBP SMART RACE RT-PCR 重组表达 抗血清制备 Western blot
简介目录: 点击此处 免费索取本论文简介和目录>>
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论文摘要: 脂多糖-β-1,3-葡聚糖结合蛋白(LGBP)作为一种模式识别受体在甲壳动物的先天免疫中占有重要地位.本文以三疣梭子蟹为研究(略)子克隆和重组表达技术,对三疣梭子蟹的LGBP进行了基因克隆、表达模式、体外重组表达以及与微生物结合能力等研究. 用金黄色葡萄球菌(Staphyloccocus aureus)和溶藻弧菌(Vibrio alginol(略))刺激三疣梭子蟹后,提取其血细胞总RNA.通过同源克隆获得了LGBP基因的保守片段,再利用SM(略)CE技术克隆得到了基因全长.该基因cDNA序列全长为1378bp,包括1095bp的开放阅读框(ORF),共编码365个氨基酸,在基因的5’端还含有138bp的非编码区(UTR),3’端含有144bp的UTR.预测的成熟肽分子量为39825.24 Da,等电点为4(略)用生物信息学方法对该基因的序列和二级结构进行了初步分析. RT-PCR结果显示LGBP基因在被检测的三(略),包括血细胞、肝胰腺、心脏、鳃和肌肉中都有表达.用混合细菌刺激三疣梭子蟹后,发现血细胞中LGBP的表达量随刺激时间呈先增高后降低的变化趋势,且在12-48...
The lipopolysaccharide -and beta-1,3-glucan-binding protein (LGBP) is a pattern (omitted)n receptor which is (omitted)l for the innate immune response of crustaceans. Based on the techniques of molecular cloning and recombination, LGBP gene was cloned from P(omitted)ituberculatus, the expression pattern, r(omitted) expression in vitor and the binding activity were also studied. Firstly, the RNA was extracted from Staphylo(omitted)eus and Vibrio alginolyticus challenged haemocytes of P.trituberculatu...
目录:
摘要第4-6页
Abstract第6-7页
引言第11-13页
1 绪论第13-25页
  ·甲壳动物免疫机制概述第13-17页
    ·细胞免疫第13-14页
    ·体液免疫第14-17页
  ·模式识别第17-22页
    ·病原相关分子模式第17页
    ·模式识别受体第17-22页
  ·脂多糖-β-1,3-葡聚糖结合蛋白研究进展第22-23页
  ·问题与展望第23-24页
  ·本研究的目的与意义第24-25页
2 三疣梭子蟹LGBP 基因的克隆第25-43页
  ·实验材料第25-27页
    ·实验动物第25页
    ·主要试剂第25-26页
    ·主要仪器第26-27页
  ·实验方法第27-35页
    ·细菌刺激实验第27页
    ·总RNA 的提取第27-28页
    ·SMANT cDNA 的合成第28页
    ·保守序列的克隆第28-31页
    ·’RACE第31-32页
    ·’RACE第32-35页
    ·生物信息学分析第35页
  ·结果与分析第35-41页
    ·总RNA 提取结果第35页
    ·保守序列的克隆第35页
    ·’RACE第35-36页
    ·’RACE第36页
    ·LGBP 基因的生物信息学分析第36-41页
  ·讨论第41-42页
    ·SMART RACE 技术第41页
    ·LGBP 特征分析第41-42页
  ·本章小结第42-43页
3 三疣梭子蟹LGBP 基因的表达模式分析第43-51页
  ·实验材料第43-45页
    ·实验动物第43页
    ·主要试剂第43-44页
    ·主要仪器第44-45页
  ·实验方法第45-46页
    ·总RNA 的提取第45-46页
  ·实验结果第46-48页
    ·三疣梭子蟹LGBP 基因的组织分布第46-47页
    ·三疣梭子蟹LGBP 基因的表达模式分析第47-48页
  ·讨论第48-49页
    ·RT-PCR第48-49页
    ·水产甲壳动物LGBP 基因的表达模式第49页
  ·本章小结第49-51页
4 三疣梭子蟹LGBP 基因的重组表达第51-68页
  ·实验材料第51-53页
    ·实验动物第51页
    ·主要试剂第51-52页
    ·主要仪器第52-53页
  ·实验方法第53-60页
    ·总RNA 的提取及SMART cDNA 的合成第53页
    ·三疣梭子蟹LGBP 基因开放阅读框的克隆第53-54页
    ·重组载体的构建第54-55页
    ·重组表达第55-56页
    ·不同诱导条件下重组蛋白的表达第56-57页
    ·非融合蛋白的纯化第57页
    ·抗血清的制备第57-58页
    ·Western blot第58-59页
    ·微生物结合实验第59-60页
  ·结果与分析第60-66页
    ·LGBP 基因ORF 分析第60-61页
    ·重组载体的鉴定第61-62页
    ·重组表达第62-64页
    ·非融合蛋白的纯化第64页
    ·血清效价及Western blot 结果第64-65页
    ·微生物结合实验第65-66页
  ·讨论第66-67页
    ·表达载体的选择第66页
    ·重组表达条件的优化第66页
    ·抗血清的制备及鉴定第66-67页
  ·本章小结第67-68页
5 总结第68-69页
参考文献第69-77页
在学研究成果第77-78页
致谢第78页
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