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重组CHO细胞的无血清悬浮培养
中文名称: 重组CHO细胞的无血清悬浮培养
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论文编号: 4142393收藏本论文】【我的收藏】【我要投稿
英文名称: Serum-free Suspension Culture of Recombinant Chinese Hamster Ovary Cells
学位类型: 硕士毕业论文
作者: 涉及隐私,隐去***  作者本人请参看权力声明>>
导师: 涉及隐私,隐去***
毕业学校: 涉及隐私,隐去***
专业: 生物化工
毕业年份: 涉及隐私,隐去***
关键字: 无血清培养 CHO细胞 流加培养
简介目录: 点击此处 免费索取本论文简介和目录>>
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论文摘要: 本文在无血清培养基SFMC的基础上,替代其中的动物源成份,开发了无动物源、无蛋白培养基PF-1,并进一步开发出化学成份确定的培养基CD(略)种培养基化学成份简单,制备方便,能很好的支持重组CHO细胞的生长. 使用PF-(略)1培养基在摇瓶中成功培养了CHO细胞.在PF-1培养基中,最高细胞密度可达到9.3×106(略)/ml,比HyQ(?) CHO-PF中培养时提高了219%.在CDM-1培养基中,最高细胞密度可达到7.3×(略)lls/ml,比GIBCO CD-CHO⑻中培养时提高了47%.并且细胞在PF-1和CDM-1中培养时产生的毒性代谢副产物很少. 在1.5 L搅拌式生物反应器中使用PF-1培养基悬浮批培养和流加培养重组CHO细胞,最大细胞密度分别为8.0×106 cells/ml和8.1×106 cells/ml,蛋白表达量分别为35.3mg/L和1(略).流加培养过程中营养物质维持是关键,通过优化PF-1悬浮培养的流加培养基,培养时间明显延长,蛋白表达量因此提高了64.3%.使用商业化培养基流加培养细胞时,利用该策略优化流加培养基之后蛋白表达量也提高了26...
In this work, animal-free, protein-free medium PF-1 and chemically-defined me(omitted) were developed replacing animal sourced com(omitted)d hydrolysates incuded in serum-free medium SFMC. The media(omitted)on is fast and easy. The Chinese hamster ovary (CHO) cells grew well in PF-1 and CDM-1. CHO cells were cultured successfully in shake flask in PF-1. The maximum cell density reach(omitted) cells/ml which was higher than that of CHO cells culutred in HyQ(?)(omitted) 219%. And CHO cells grew well i...
目录:
摘要第5-6页
Abstract第6页
第1章 文献综述第10-18页
  ·动物细胞表达系统第10-11页
  ·CHO细胞培养第11-15页
    ·细胞培养环境控制第11-13页
    ·体外培养动物细胞的代谢和控制策略第13-14页
    ·无血清培养基第14-15页
  ·流加培养第15-17页
    ·流加培养的优势第15-16页
    ·初始培养基第16页
    ·流加培养基的优化第16-17页
    ·流加培养工艺的优化第17页
  ·本课题的研究背景和意义第17-18页
第2章 重组CHO细胞无血清培养基的建立第18-30页
  ·前言第18页
  ·实验材料和方法第18-20页
    ·实验材料第18页
    ·有血清细胞培养第18-19页
    ·无血清驯化和悬浮培养第19页
    ·CHO悬浮细胞冻存和复苏第19页
      ·CHO悬浮细胞冻存第19页
      ·CHO悬浮细胞复苏第19页
    ·分析方法第19-20页
      ·细胞计数第19-20页
  ·结果与讨论第20-29页
    ·CHO细胞的无血清驯化第20页
    ·无动物源、无蛋白培养基PF-1的建立第20-27页
      ·铁盐替代牛转铁蛋白第21-22页
      ·锌盐替代牛胰岛素第22-23页
      ·非动物源蛋白水解物替代动物组织水解物第23-24页
      ·无动物源、无蛋白培养基PF-1第24-27页
    ·无动物源、无蛋白、化学成份确定的培养基CDM-1的建立第27-29页
  ·小结第29-30页
第3章 重组CHO细胞在无血清培养基中的代谢第30-37页
  ·前言第30页
  ·材料和方法第30-31页
    ·细胞株和培养方法第30页
    ·计算方法第30页
    ·AAFP蛋白浓度测定第30-31页
  ·结果与讨论第31-36页
    ·CHO-AAFP细胞株在各无血清培养基中的生长情况第31-32页
    ·CHO-AAFP细胞在各无血清培养条件下葡萄糖的代谢第32-35页
    ·CHO-AAFP细胞在各无血清培养条件下氨的生成情况第35页
    ·CHO-AAFP细胞在各无血清培养基中蛋白表达情况第35-36页
  ·小结第36-37页
第4章 利用PF-1培养基在生物反应器中无血清悬浮流加培养CHO-AAFP细胞第37-46页
  ·前言第37页
  ·实验材料和方法第37-39页
    ·实验材料与设备第37页
    ·培养基第37-38页
    ·细胞培养第38页
    ·分析和计算方法第38页
    ·流加策略第38-39页
  ·结果与讨论第39-45页
    ·PF-1培养基中分批培养CHO-AAFP细胞第39-41页
    ·使用流加培养基F-1流加培养CHO-AAFP细胞第41-43页
    ·使用流加培养基F-2流加培养CHO-AAFP细胞第43-45页
  ·小结第45-46页
第5章 利用商业化培养基在生物反应器中无血清悬浮流加培养CHO-AAFP细胞第46-52页
  ·前言第46页
  ·实验材料与设备第46页
    ·实验材料与设备第46页
    ·培养基第46页
    ·细胞培养第46页
    ·分析和计算方法第46页
    ·流加策略第46页
  ·结果与讨论第46-51页
    ·使用流加培养基F-1流加培养基CHO-AAFP细胞第46-49页
    ·使用流加培养基F-3流加培养CHO-AAFP细胞第49-51页
  ·小结第51-52页
第6章 结论与展望第52-53页
  ·结论第52页
  ·展望第52-53页
参考文献第53-61页
发表论文第61-62页
致谢第62页
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