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白假丝酵母脂肪酶CaLIP5的重组表达及性质研究
中文名称: 白假丝酵母脂肪酶CaLIP5的重组表达及性质研究
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论文编号: 4142090收藏本论文】【我的收藏】【我要投稿
英文名称: Cloning, Expression and Characterization of Candida Albicans Lipase 5
学位类型: 硕士毕业论文
作者: 涉及隐私,隐去***  作者本人请参看权力声明>>
导师: 涉及隐私,隐去***
毕业学校: 涉及隐私,隐去***
专业: 发酵工程
毕业年份: 涉及隐私,隐去***
关键字: 脂肪酶 白假丝酵母 响应面
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论文摘要: 脂肪酶是世界三大工业用酶之一,脂肪酶开发和应用研究是生物技术领域的热点.C. albicans基因组中含有十个脂肪酶基因.对白假丝酵母的脂肪酶进行克隆,构建工程菌进行重组表达,以及(略)研究,具有重要意义.本论文(略) albicans ATCC 10231菌株中成功克隆了一个脂肪酶基因lip5,通过定点突变的方法,实现了在P. pastoris X33中的分泌重组表达.通过性质研究发现,重组表达的(略)具有一些重要的生化性质,使其成为一种很有潜力的生物催化剂.(略): CaLIP5的克隆和表达和生物信息学分析.利用PCR方法直接从Candida albicans ATCC 10231基因组中得到新的脂肪酶基因lip5,并进行了测序.结果提交到GenBank,编号为HM581681.通过定点突变,将li(略)两个特殊的Ser密码子替换成普通的Ser密码子,实现了在P. pastoris X33中的重组表达.在YPD培养基中,30℃,发酵培养72h之后,以对硝基苯酚辛酸酯为底物,测得的酶活为7.56 U/mL.序列比对发现,CaLIP5的催化三联体为Ser-194、Asp-3...
Lipases play an important role in the function of pharmaceutical and agrochemical productio(omitted)c syn(omitted)l industry and detergent additives. It is a hot spot of biotechnology to develop new lipases. Recently, lipases from Candida albicans ha(omitted)ceived more attentions because of their biological function and potential applic(omitted) had been shown that there were ten lipases ge(omitted)gh homologies in C. albicans. However, only a few work had been carried out in characterization of these...
目录:
摘要第5-6页
Abstract第6-7页
第1章 绪论第12-29页
  ·脂肪酶的研究进展第12-17页
    ·脂肪酶介绍第12页
    ·脂肪酶的性质第12-14页
    ·脂肪酶的结构与功能关系第14-16页
    ·脂肪酶的应用第16-17页
  ·微生物脂肪酶第17-21页
    ·微生物脂肪酶的来源第17-18页
    ·微生物脂肪酶的产生第18页
    ·微生物脂肪酶活性的检测和测定第18-19页
    ·微生物脂肪酶的纯化第19页
    ·微生物脂肪酶基因工程重组表达技术第19-21页
  ·白假丝酵母脂肪酶第21-24页
    ·白假丝酵母及其脂肪酶第21页
    ·脂肪酶在白假丝酵母生长中的作用第21-22页
    ·白假丝酵母脂肪酶基因第22页
    ·白假丝酵母脂肪酶的表达第22-23页
    ·白假丝酵母脂肪酶的重组表达第23-24页
  ·响应面法第24-27页
    ·响应面法介绍第24-25页
    ·响应面法在培养基和发酵过程的优化研究中的应用第25-27页
  ·本课题的研究意义、设计思路及主要创新点第27-29页
    ·本课题的研究意义第27-28页
    ·本课题的设计思路第28-29页
第2章 白假丝酵母脂肪酶基因克隆第29-49页
  ·引言第29页
  ·材料与设备第29-32页
    ·菌株、质粒第29页
    ·试剂第29-30页
    ·主要溶液及培养基配置第30-31页
    ·主要设备第31-32页
  ·实验方法第32-42页
    ·培养与保存白假丝酵母第32页
    ·白假丝酵母基因组的提取第32页
    ·白假丝酵母脂肪酶基因lip5 的克隆及全长基因序列测定第32-36页
    ·定点突变白假丝酵母脂肪酶基因lip5第36-38页
    ·毕赤酵母表达载体构建第38-39页
    ·毕赤酵母重组表达菌株的构建及筛选第39-41页
    ·CaLIP5 在毕赤酵母中的表达第41-42页
  ·结果与讨论第42-47页
    ·白假丝酵母脂肪酶基因lip5 的克隆及序列测定和分析第42-43页
    ·白假丝酵母脂肪酶基因lip5 的定点突变第43-44页
    ·毕赤酵母表达载体的构建第44-45页
    ·毕赤酵母重组表达菌株的构建与筛选第45-46页
    ·CaLIP5 在毕赤酵母中的表达第46-47页
  本章小结第47-49页
第3章 CaLIP5 蛋白序列分析和结构预测第49-61页
  ·引言第49页
  ·材料与设备第49-50页
    ·生物信息学工具第49页
    ·网络资源第49-50页
  ·实验方法第50-51页
    ·一级结构分析第50页
    ·疏水性、极性分析和跨膜结构域预测第50-51页
    ·蛋白质Motif 及结构域家族搜索第51页
    ·二级结构预测第51页
    ·同源建模预测三级结构第51页
  ·结果与讨论第51-60页
    ·CaLIP5 一级结构分析第51-52页
    ·疏水性、极性和跨膜结构域第52-53页
    ·CaLIP5 Motif 分析和结构域家族搜索第53-54页
    ·CaLIP5 二级结构分析第54-57页
    ·CaLIP5 同源建模第57-60页
  本章小结第60-61页
第4章 培养基成分和培养条件对毕赤酵母重组表达CaLIP5 的影响第61-69页
  ·引言第61页
  ·材料与设备第61页
  ·实验方法第61-63页
    ·重组毕赤酵母的培养及生长曲线测定第61页
    ·脂肪酶活力测定第61页
    ·中心组合设计第61-62页
    ·统计分析第62-63页
  ·结果与讨论第63-68页
    ·重组毕赤酵母细胞生长及酶活变化第63页
    ·回归方程分析第63-64页
    ·各因素对重组CaLIP5 表达的影响第64-68页
    ·最优条件的确定及验证第68页
  本章小结第68-69页
第5章 CaLIP5 的纯化及性质研究第69-80页
  ·引言第69页
  ·材料与设备第69-71页
    ·试剂第69页
    ·主要溶液配制第69-70页
    ·主要设备第70-71页
  ·实验方法第71-73页
    ·重组CaLIP5 的纯化第71页
    ·CaLIP5 的非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳及活性染色第71-72页
    ·重组CaLIP5 的底物特异性第72页
    ·温度对重组CaLIP5 的酶活及稳定性的影响第72页
    ·pH 对重组CaLIP5 的酶活及稳定性的影响第72页
    ·各种化学物质、表面活性剂和有机溶剂对重组CaLIP5 的影响第72-73页
    ·重组CaLIP5 的动力学常数及活化能测定第73页
  ·结果及讨论第73-79页
    ·重组CaLIP5 的纯化第73页
    ·CaLIP5 的非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳及活性染色第73-74页
    ·重组CaLIP5 的底物特异性第74-75页
    ·温度对重组CaLIP5 的酶活及稳定性的影响第75-76页
    ·pH 对重组CaLIP5 的酶活及稳定性的影响第76页
    ·各种化学物质、表面活性剂和有机溶剂对重组CaLIP5 的影响第76-78页
    ·重组CaLIP5 的催化常数第78-79页
  本章小结第79-80页
结论与展望第80-82页
  结论第80-81页
  本课题的创新点第81页
  展望第81-82页
参考文献第82-95页
攻读硕士学位期间取得的研究成果第95-96页
致谢第96-97页
附件第97页
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