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钙依赖型蛋白酶Calpain介导的蛋白水解对粘附斑解体作用的研究
中文名称: 钙依赖型蛋白酶Calpain介导的蛋白水解对粘附斑解体作用的研究
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论文编号: 4141901收藏本论文】【我的收藏】【我要投稿
英文名称: Calcium-Dependent Protease, Calpain Mediated Disassembly of Focal Adhesion in Living Cells
学位类型: 硕士毕业论文
作者: 涉及隐私,隐去***  作者本人请参看权力声明>>
导师: 涉及隐私,隐去***
毕业学校: 涉及隐私,隐去***
专业: 遗传学
毕业年份: 涉及隐私,隐去***
关键字: 粘附斑水解 calpain talin 磷酸化位点定点突
简介目录: 点击此处 免费索取本论文简介和目录>>
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论文摘要: 钙依赖型蛋白酶calpain可以以多种组成粘附斑的分子元件为底物而将其裂解,使粘附斑解体,因而可能是诱导粘附斑解体的主要原因.分别使用上皮生长因子(Epidema(略)th Factor, EGF)或蛋白激酶A (protein kinase A, PKA)激活或抑制calpain 2的蛋白水解酶活性,通过免疫荧光和West(略)ot等技术来研究calpain 2对由paxillin和vinculin等几种细胞骨架蛋白构成的粘附斑(略)证明calpain 2水解蛋白是导致细胞尾部粘附斑水解的主要原因.在生理Ca2+浓度条件下,此步骤可受EGF和PKA调控.免疫荧光证实在EGF激活条件下,粘附斑水解的程度增强,但在数目仅表现为减少,减少程度并不与诱导时间呈对应关系;而粘附斑大小整体(略)程度与时间呈对应关系.在PKA抑制条件下,抑制程度随PKA浓度增加增强,其中5ug/ml及以上浓度抑制作用明显.Western Blot结果显示在EGF或PKA激活或抑制条件下paxillin和vinculin在细胞内的含量均无明显变化,表明Calpain依赖于(略)lin蛋白的水解来调节paxil...
Calpain, the calcium-dependent protease, (omitted) various molecular components of focal adhesion to disassemble focal adhesion. Calpain2 in living cells was activa(omitted)ibited with epidermal growth factors (EGF) or the protein kinase A (PKA) respec(omitted)d the disassembly of focal adhesion compounds including paxillin and (omitted)y calpain2 was studied using immunofluorescent technique and western blotting. The results indicated that calpain2-mediated protein protease is the main(omitted) disass...
目录:
摘要第3-5页
ABSTRACT第5-6页
1 引言与文献综述第9-24页
  ·粘附斑解体与细胞迁移第9-13页
  ·Calpain与粘附斑水解第13-18页
  ·Calpain水解talin蛋白与粘附斑水解第18-21页
  ·重组PCR诱导定点突变第21-22页
  ·本文的研究目的和意义第22-24页
2 材料与方法第24-53页
  ·材料第24-32页
    ·仪器设备第24-26页
    ·主要试剂和耗材第26-27页
    ·菌种与细胞第27页
    ·常用溶液和培养基的配制与保存第27-32页
  ·方法与步骤第32-53页
    ·细胞培养第32-35页
    ·Calpain 2诱导细胞骨架蛋白水解对粘附斑解体效率影响的检测第35-41页
    ·Talin头部基因定点突变及重组质粒的构建第41-51页
    ·建立研究磷酸化位点对calpain水解talin影响的检测方法第51-53页
3 结果与分析第53-62页
  ·Calpain 2诱导细胞骨架蛋白水解对粘附斑解体效率影响的检测第53-59页
    ·免疫荧光检测,EGF诱导激活calpain 2后,CHO细胞粘附斑解体随时间变化的特征第53-56页
    ·免疫荧光检测,不同浓度PKA抑制calpain2下,CHO细胞粘附斑解体的效率第56-58页
    ·免疫沉淀和免疫印迹检测EGF诱导激活calpain 2后,CHO细胞粘附斑解体随时间变化的特征第58页
    ·免疫沉淀和免疫印迹检测不同浓度PKA抑制calpain2下,CHO细胞粘附斑解体随时间变化的特征第58-59页
  ·Talin头部基因定点突变及重组质粒的构建第59-60页
  ·建立研究磷酸化位点对calpain水解talin影响的检测方法第60-62页
4 讨论第62-67页
  ·Calpain 2诱导细胞骨架蛋白水解对粘附斑解体效率影响的检测第62-64页
  ·Talin头部基因定点突变及重组质粒的构建第64-66页
    ·Talin头部基因片段定点突变设计讨论第64-65页
    ·构建重组质粒时遇到的困难第65-66页
  ·建立研究磷酸化位点对calpain水解talin影响的检测方法的讨论第66-67页
5 结语第67-69页
参考文献第69-79页
附录第79-80页
攻读学位期间科研成果第80-81页
致谢第81-82页
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