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新疆荒漠昆虫光滑鳖甲抗冻蛋白的性质及功能研究
中文名称: 新疆荒漠昆虫光滑鳖甲抗冻蛋白的性质及功能研究
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论文编号: 4140153收藏本论文】【我的收藏】【我要投稿
英文名称: Characterization and Functional Study of Antifreeze Proteins from the Desert Beetle Anatolica Polita
学位类型: 博士毕业论文
作者: 涉及隐私,隐去***  作者本人请参看权力声明>>
导师: 涉及隐私,隐去***
毕业学校: 涉及隐私,隐去***
专业: 动物学
毕业年份: 涉及隐私,隐去***
关键字: 荒漠昆虫 抗冻蛋白 热滞活性 热稳定性 低温保护作用
简介目录: 点击此处 免费索取本论文简介和目录>>
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       论文发表:快速、低价、包过!发表论文就找论文天下

论文摘要: 本研究采用实验室前期从新疆荒漠甲虫光滑鳖甲Anatolica polita体内获得的抗冻蛋白基因Apafp752和Apafp914,构建不同的表达质粒,通过原核表达获得了具有不同标签的(略)抗冻蛋(略)s.采用微升渗透压仪和差示扫描量热仪对ApAFPs的热滞活性(THA)进行测定,同时观察了其对冰晶的修饰作用;通过测定ApAFPs对菌体的体外低温保护作用进一步验证其抗冻活性,并对光滑鳖甲抗冻蛋白的热稳定性、酸碱稳定性及亲水性进行了研究,结果表明ApAFPs具有较强的热稳定性,酸碱耐受性和较高的亲水性.检测了盐溶液NaCl、KCl、CaCl2、MgCl2;多羟基醇类物质甘(略)及羧酸盐Na2CO3、NaAC、(略)DTA二钠盐对重组光滑鳖甲抗冻蛋白ApAFP752热滞活性的影响.采用圆二色谱法对ApAFPs的二级结构组成进行了测定,建立了ApAFPs的三维结构模型,并利用生物信息学方法分别从氨基酸组成,蛋白序列同源性检索,蛋白序列相似性比对,等电点预测,序列疏水性(略)构预测以及同源进化关系等方面进行预测,系统研究了两种光滑鳖甲抗冻蛋白与其它昆虫抗冻蛋白之间的关系,探讨了其结构与功...
Antifreeze genes Apafp752 and Apafp914 isolated from Xinjiang desert insect Anato(omitted)a in previous work were constructed with different expressive plasmids and the corresponding mature p(omitted) been expressed in E. coli respectively. The thermal hysteresis activity (THA) of ApAFPs was (omitted)y micro-(omitted)meter or differentiated scanning calorimeter (DSC), and the modification of the ApAFPs to ice crystals was observed. The antifreeze acti(omitted)e ApAFPs was further confirmed by assay of ...
目录:
中文摘要第4-7页
ABSTRACT第7-10页
第一部分 文献综述第18-61页
  第1章 昆虫抗冻蛋白结构与功能关系的研究第18-28页
    ·超强的抗冻活性第19-20页
    ·规则的一级结构第20-21页
    ·相似的冰晶结合表面第21-22页
    ·昆虫AFPs 的起源与演化第22-23页
    参考文献第23-28页
  第2章 昆虫抗冻蛋白作用机理的研究进展第28-39页
    ·吸附-抑制理论第28页
    ·影响AFP 热滞活性的因素第28-32页
      ·AFP 与不同冰晶表面结合的影响第28-29页
      ·AFP 分子大小的影响第29-30页
      ·AFP 溶解度的影响第30-31页
      ·增效剂对AFP 热滞活性的影响第31-32页
    ·AFPs 与细胞膜的作用机制第32-33页
    参考文献第33-39页
  第3章 抗冻蛋白在低温保护生物学领域的研究进展第39-61页
    ·AFP 对动物胚胎低温保护作用的研究第39-43页
      ·动物胚胎低温保存技术及影响因素第39-40页
      ·AFP 在动物胚胎低温保存中的应用第40-42页
      ·AFP 应用于动物胚胎低温保存的展望第42-43页
    ·AFP 对真核细胞和脏器的低温保护作用及保护机理研究第43-47页
      ·在0-4℃低温下的保护作用第43-44页
      ·在零下低温的保护作用第44-45页
      ·AFP 在低温保存中的作用机理第45-47页
    ·AFP 在食品冷冻保鲜领域的应用前景第47-48页
    ·转基因抗冻生物的研究进展第48-50页
      ·AFP 转基因动物的研究第48-49页
      ·AFP 转基因植物的研究第49-50页
    参考文献第50-61页
第二部分 新疆荒漠昆虫光滑鳖甲抗冻蛋白ApAFP 的表达与性质研究第61-162页
  第1章 光滑鳖甲抗冻蛋白ApAFP752 的原核表达及性质研究第61-86页
    ·材料和方法第63-69页
      ·材料与试剂第63-64页
      ·常规溶液第64页
      ·引物设计与合成第64页
      ·抗冻蛋白基因Apafp752 的克隆第64-66页
      ·原核表达载体的构建第66页
      ·融合蛋白TrxA-ApAFP752 的表达、SDS-PAGE 检测及纯化第66-67页
      ·蛋白印迹分析第67页
      ·融合蛋白TrxA-ApAFP752 的热滞活性测定第67-68页
      ·体外低温保护活性分析第68-69页
      ·pH 稳定性和热稳定性第69页
      ·三维结构模型建立第69页
    ·结果第69-79页
      ·ApAFP752 的序列分析第69-70页
      ·原核表达载体的构建第70-71页
      ·TrxA- ApAFP752 的表达及纯化第71-73页
      ·TrxA-ApAFP752 对冰晶形态的修饰作用第73-74页
      ·体外低温保护活性分析第74-76页
      ·pH 稳定性和热稳定性第76-77页
      ·ApAFP752 的三维结构预测第77-79页
    ·讨论第79-82页
    参考文献第82-86页
  第2章 光滑鳖甲抗冻蛋白ApAFP752 的热力学性质研究第86-99页
    ·材料与方法第88-90页
      ·重组抗冻蛋白ApAFP752 的制备第88-89页
      ·差示扫描量热(DSC)分析第89页
      ·热重分析第89页
      ·圆二色光谱分析第89-90页
    ·结果第90-95页
      ·差示扫描量热(DSC)分析第90-93页
      ·热重分析第93-94页
      ·CD 光谱分析第94-95页
    ·讨论第95-96页
    参考文献第96-99页
  第3章 小分子物质对重组光滑鳖甲抗冻蛋白ApAFP752 的增效作用第99-112页
    ·材料与方法第101-102页
      ·材料与试剂第101页
      ·重组ApAFP752 的制备第101页
      ·热滞活性测定第101-102页
    ·结果第102-106页
      ·盐离子对ApAFP752 的增效作用第102-103页
      ·羧基化合物对ApAFP752 的增效作用第103-105页
      ·多羟基化合物对ApAFP752 的增效作用第105-106页
    ·讨论第106-108页
    参考文献第108-112页
  第4章 两种重组光滑鳖甲抗冻蛋白ApAFP914 的比较研究第112-143页
    ·材料和方法第115-122页
      ·材料与试剂第115页
      ·His-ApAFP914 的引物设计与合成第115页
      ·EGFP-ApAFP914 的引物设计与合成第115-116页
      ·抗冻蛋白基因Apafp914 和绿色荧光蛋白基因egfp 的PCR 扩增第116页
      ·原核表达载体pET28a-Apafp914 的构建第116-117页
      ·原核表达载体pET28a-egfp-Apafp914 的构建第117页
      ·感受态细胞的制备及转化第117-118页
      ·重组蛋白His-ApAFP914 的表达及SDS-PAGE 检测第118页
      ·重组蛋白His-ApAFP914 包涵体的复性及纯化第118页
      ·重组蛋白EGFP-ApAFP914 的表达及SDS-PAGE 检测与纯化第118-119页
      ·重组蛋白ApAFP914 的蛋白印迹分析第119页
      ·两种重组ApAFP914 的热滞活性测定及冰晶形态观察第119-120页
      ·两种重组ApAFP914 的体外低温保护活性分析第120页
      ·pH 稳定性和热稳定性检测第120-121页
      ·His-ApAFP914 的圆二色光谱分析第121页
      ·ApAFP914 三维结构模型建立第121-122页
    ·结果第122-134页
      ·ApAFP914 的序列分析第122-123页
      ·原核表达载体pET28a-Apafp914 的构建第123-124页
      ·原核表达载体pET28a-egfp-Apafp914 的构建第124页
      ·His-ApAFP914 的表达及纯化第124-126页
      ·EGFP-ApAFP914 的表达与纯化第126-127页
      ·重组ApAFP914 的热滞活性测定及冰晶形态观察第127-130页
      ·重组ApAFP914 体外低温保护活性分析第130-132页
      ·两种重组ApAFP914 的pH 稳定性和热稳定性第132-133页
      ·His-ApAFP914 的CD 光谱分析第133-134页
    ·讨论第134-138页
    参考文献第138-143页
  第5章 光滑鳖甲抗冻蛋白生物信息学研究及结构与功能的比较第143-162页
    ·材料与方法第145-146页
      ·材料第145页
      ·序列比对、疏水性及等电点分析方法第145-146页
      ·圆二色光谱分析第146页
      ·三维结构模型建立第146页
    ·结果与分析第146-154页
      ·氨基酸序列同源性检索第146-148页
      ·序列分析第148-149页
      ·同源进化树的构建第149-150页
      ·疏水性分析第150-151页
      ·二级结构测定第151-152页
      ·三维结构预测第152-154页
    ·讨论第154-157页
    参考文献第157-162页
第三部分 重组光滑鳖甲抗冻蛋白的低温保护应用研究第162-197页
  第1章 重组光滑鳖甲抗冻蛋白内源性表达对菌体低温存活的影响第162-173页
    ·材料与方法第164-165页
      ·材料第164页
      ·感受态细胞的制备及转化第164页
      ·重组蛋白EGFP-ApAFP914 在菌体中的表达及检测第164-165页
      ·表达菌低温存活率的测定第165页
      ·低温处理后表达菌的生长曲线第165页
    ·结果第165-168页
      ·重组蛋白在菌体中的表达及检测第165-166页
      ·表达菌低温存活率的测定第166-167页
      ·低温处理后表达菌的生长曲线第167-168页
    ·讨论第168-170页
    参考文献第170-173页
  第2章 重组光滑鳖甲抗冻蛋白改善哺乳动物红细胞的低温保存第173-185页
    ·材料与方法第175-177页
      ·材料第175页
      ·重组光滑鳖甲抗冻蛋白ApAFP914 的制备第175-176页
      ·红细胞的制备第176页
      ·重组ApAFP914 对红细胞的毒性检测第176页
      ·抗冻蛋白对低温保存红细胞的保护分析第176页
      ·红细胞渗透性分析第176-177页
      ·统计学分析第177页
    ·结果第177-180页
      ·rApAFP914 对红细胞的毒性分析第177页
      ·rApAFP914 对零下低温-3℃处理的红细胞的保护作用第177-179页
      ·rApAFP914 对4℃处理的红细胞的保护作用第179-180页
    ·讨论第180-182页
    参考文献第182-185页
  第3章 重组光滑鳖甲抗冻蛋白对反复冻融的乳酸脱氢酶活性影响第185-197页
    ·材料与方法第186-189页
      ·材料第186-187页
      ·重组光滑鳖甲抗冻蛋白的制备第187-188页
      ·重组光滑鳖甲抗冻蛋白的热滞活性测定第188页
      ·测定使乳酸脱氢酶LDH 失活的冻融次数第188页
      ·重组光滑鳖甲抗冻蛋白对LDH 的低温保护分析第188-189页
    ·结果第189-192页
      ·重组光滑鳖甲抗冻蛋白的热滞活性测定第189页
      ·LDH 失活冻融次数的确定第189-190页
      ·重组ApAFPs 对LDH 活性影响第190-192页
    ·讨论第192-194页
    参考文献第194-197页
第四部分 结论与展望第197-198页
  ·新疆荒漠甲虫光滑鳖甲抗冻蛋白的表达及性质研究第197页
  ·光滑鳖甲抗冻蛋白的低温保护应用研究第197-198页
附录1 英文缩略语第198-199页
附录2 主要实验仪器第199-200页
致谢第200-201页
个人简介第201页
攻读博士学位期间发表学术论文第201页
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