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凝集素基因克隆及功能分析
中文名称: 凝集素基因克隆及功能分析
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论文编号: 4134341收藏本论文】【我的收藏】【我要投稿
英文名称: Cloning and Functional Analysis of Agglutinin Genes
学位类型: 硕士毕业论文
作者: 涉及隐私,隐去***  作者本人请参看权力声明>>
导师: 涉及隐私,隐去***
毕业学校: 涉及隐私,隐去***
专业: 生物化学与分子生物学
毕业年份: 涉及隐私,隐去***
关键字: 蚜虫 三叶半夏 掌叶半夏 海芋 RACE
简介目录: 点击此处 免费索取本论文简介和目录>>
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论文摘要: 目前农业生产中,蚜虫危害十分严重,造成巨大的经济损失.转基因技术的发展为植物抗蚜品种的(略)的途径.已有研究表明,植物凝集素作为一种非免疫球蛋白,是一种潜在的抗蚜候选蛋白.因此,本研究拟以抗蚜虫的三叶半夏、掌叶半夏及海芋为材料进行凝集素基因的克隆,并导入到模式植物烟草中进行抗(略)以期为植物抗蚜基因工程的研究提供新的基因源.主要研究结果如下: 1、根据已获得的天南星科凝集素基因保守区序列设计简并引物,利用同源克隆技术以提取的三叶半夏RNA反转录(略)A为模板,通过PCR扩增获得了约400 bp的基因片段,然后通过3’和5’RACE技术克隆得到了该基因的全长cDNA序列,序列分析表明:该基因cDNA全长为1173 bp,开放读码框为810 bp,编码269个氨基酸的前体蛋白;编码蛋(略)DNY结构域,即甘露糖结合位点,推测其可能为凝集素基因;然后与已公布的凝集素进行同源性分析,发现该基因编码蛋白与其他天南星科凝集素基因编码蛋白相似性介于76%~91%,进一步说明了该基因可能为单子叶甘(略)因,命名为PtLec. 2、按照相似方法,从海芋中获得了一个基因的全长cDNA序列...
Aphids are sap sucking insect pests causing serious economic losses. It is reported that lec(omitted) as non-immunoglobulin, had s(omitted)od cadidate protein for aphids resistance. In order to clone more effective genes for anti-ap(omitted)n genes from Pinclia ternate、Alocasia macrorhiza、Pinellia pedatisecta, were cloned and transformed into toba(omitted)d of model plants) through Agrobacterium-mediated transformation. The resistance ability of transgenic tabacco(omitted) had been investigated. The ma...
目录:
摘要第6-7页
Abstract第7-8页
第1章 文献综述第12-23页
  ·蚜虫防治研究进展第12-15页
  ·凝集素概述第15-18页
    ·植物凝集素分类第15-16页
    ·凝集素作为植物天然防御蛋白的证据第16-17页
    ·凝集素的抗虫作用机制第17页
    ·几种重要的凝集素及抗虫基因工程第17-18页
  ·蚜虫防治存在的问题第18-19页
  ·解决问题的策略第19-21页
    ·新的抗蚜虫基因筛选第19-21页
    ·寻求合适的启动子第21页
    ·联合使用两种及以上的抗蚜虫基因第21页
  ·研究目的及意义第21-23页
第2章 材料与方法第23-40页
  ·实验材料第23-27页
    ·植物材料第23页
    ·实验菌株和克隆载体第23页
    ·培养基及实验所用试剂配制第23-25页
    ·主要酶和常规生化试剂第25页
    ·实验仪器第25页
    ·所用引物第25-27页
  ·方法第27-40页
    ·植物RNA 的提取及检测第27-28页
    ·凝集素中间片段、3’端、5’端、全长的获得第28-33页
    ·连接T-Vector(Takara 公司pMD19-T)第33页
    ·大肠杆菌感受态的制备第33页
    ·大肠杆菌感受态细胞的转化第33-34页
    ·大肠质粒的提取(碱裂解法)第34页
    ·表达载体的构建(以p2300-35S-PtLec 载体的构建为例)第34-36页
    ·根癌农杆菌4404 感受态的制备,转化第36-37页
    ·农杆菌介导的遗传转化第37页
    ·阳性植株抗蚜能力检测第37-38页
    ·原核表达蛋白与纯化及蛋白含量测定第38-40页
第3章 结果与分析第40-62页
  ·三叶半夏凝集素基因的克隆及序列分析第40-45页
    ·三叶半夏凝集素基因cDNA 全长序列的获得第40-42页
    ·三叶半夏凝集素基因序列分析第42-45页
  ·海芋凝集素基因的克隆及序列分析第45-48页
    ·海芋凝集素基因cDNA 全长的获得第45-46页
    ·海芋凝集素基因序列分析第46-48页
  ·掌叶半夏凝集素基因的克隆及序列分析第48-52页
    ·掌叶半夏凝集素cDNA 全长的获得第48-49页
    ·掌叶半夏凝集素基因序列分析第49-52页
  ·所获凝集素基因植物表达载体的构建第52-56页
    ·由RbcS1 启动子驱动的植物表达载体框架图第52页
    ·由35S 启动子驱动的植物表达载体框架图第52页
    ·以RbcS1 启动子驱动的ptlec 植物表达载体的构建过程为例,示意图第52-53页
    ·获得的凝集素基因植物表达载体构建多酶切检测结果图第53-56页
    ·多酶切检测结果分析第56页
  ·植物表达载体转化烟草及分子检测第56-57页
  ·转基因烟草的抗蚜能力初步检测第57-58页
  ·凝集素基因原核表达载体构建及表达纯化第58-62页
第4章 结论第62-63页
参考文献第63-69页
致谢第69-70页
作者简历第70页
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