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蓖麻蚕和柞蚕核型多角体病毒经口感染及其解旋酶基因的分析
中文名称: 蓖麻蚕和柞蚕核型多角体病毒经口感染及其解旋酶基因的分析
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论文编号: 3729212收藏本论文】【我的收藏】【我要投稿
英文名称: Analysis of Oral Infection and Helicase Gene of the Nucleopolyhedroviruses Isolated from Philosamia Cynthia Ricini and Antheraea Pernyi
学位类型: 硕士毕业论文
作者: 涉及隐私,隐去***  作者本人请参看权力声明>>
导师: 涉及隐私,隐去***
毕业学校: 涉及隐私,隐去***
专业: 生物化学与分子生物学
毕业年份: 涉及隐私,隐去***
关键字: 蓖麻蚕核型多角体病毒 柞蚕核型多角体病毒 解旋酶基因 序列分析 感染性 宿主域 蓖麻蚕
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论文简介:杆状病毒是有囊膜的双链闭合环状DNA大形病毒,其基因组大小为80-180kb,主要以鳞翅目昆虫为宿主,迄今仅从节肢动物(绝大部分从昆虫)中分离出来,而且都具有高度的宿主特异性。蓖麻蚕(Philosamia cynthia ricini)和柞蚕(Antheraea pernyi)都是具有较高经济价值的泌丝昆虫,都容易被核型多角体病毒感染。柞蚕核型多角体病毒(Antheraea pernyi nucleopolyhedrovirus,AnpeNPV)的基因组序列已经完成,而对蓖麻蚕核型多角体病毒(Philosamia cynthia ricini nucleopolyhedrovirus,PcrNPV)的基因组序列则知之甚少。以前的研究发现这两种病毒在感染性上有一定联系,为了弄清它们之间的关系,本论文分离纯化了蓖麻蚕和柞蚕核型多角体病毒,对其感染性进行了研究,并对这两种病毒的解旋酶(helicase)基因进行了分析。从而了解这两种病毒的相互感染特性,查明昆虫病毒的宿主特异性或宿主域,对进一步了解杆状病毒宿主域决定机制打下基础。本研究的主要结论如下: 1、分离纯化了蓖麻蚕和柞蚕核型多角体病毒,经电镜观察,两种多角体大多呈大小均一的三角体,大小为1-3 μm。 2、用经口感染的方法观察柞蚕和蓖麻蚕幼虫食下后的变化。经镜检发现AnpeNPV能感染柞蚕和蓖麻蚕幼虫,感染率分别为78%和57%。纯化病虫尸体中收集的多角体,提取DNA,进行Hind Ⅲ、SalⅠ、XhoⅠ和PstⅠ酶切图谱鉴定,结果发现酶切图谱与添毒多角体DNA的酶切图谱一致;而PcrNPV只能感染蓖麻蚕幼虫,感染率为79%,对柞蚕几乎没有感染力。 3、PcrNPV与AnpeNPV基因组DNA分别转染BmN和Tn5昆虫细胞系,细胞都没有明显的感染症状。 4、进一步构建了PcrNPV DNA PstⅠ酶切片段文库,挑取阳性克隆测序,测得的序列与AnpeNPV基因组序列的同源性均在95%以上,所以PcrNPV与AnpeNPV的同源性非常高。 5、helicase基因氨基酸同源性构建的分子进化树状图表明:PcrNPV与AnpeNPV的helicase基因进化关系较近,而与AcMNPV及BmNPV等的进化关系较远。 6、分析了PcrNPV和AnpeNPV的helicase基因,结果发现PcrNPVhelicase基因与AnpeNPV的helicase基因在杆状病毒的宿主域决定区、核定位信号区和C端7个基序上,氨基酸序列完全相同,仅在靠近DNA结合区螺旋-转角-螺旋结构处(974位)有1个氨基酸不同,推测helicase基因可能不是决定它们宿主域差异的主要原因。 所以蓖麻蚕和柞蚕核型多角体病毒在基因组序列上同源性很高,但是宿主域范围有差别。
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