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重组质粒pPIC9K-pZP3α-hCGβCTP~(109~145)的构建及重组抗原pZP3 α-hCG β CTP~(109~145)在毕赤酵母中的表达
中文名称: 重组质粒pPIC9K-pZP3α-hCGβCTP~(109~145)的构建及重组抗原pZP3 α-hCG β CTP~(109~145)在毕赤酵母中的表达
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论文编号: 3688674收藏本论文】【我的收藏】【我要投稿
英文名称: Construction and Expression of the Recombinant Plasmid pPIC9K-pZP3α-hCGβ-CTP~(109~145) in the Yeast Pichia Pastoris
学位类型: 硕士毕业论文
作者: 涉及隐私,隐去***  作者本人请参看权力声明>>
导师: 涉及隐私,隐去***
毕业学校: 涉及隐私,隐去***
专业: 发育生物学
毕业年份: 涉及隐私,隐去***
关键字: 卵透明带 人绒毛膜促性腺激素 部分重叠聚合酶链式反应 重组质粒 毕赤酵母
简介目录: 点击此处 免费索取本论文简介和目录>>
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论文摘要: 目的:为发展多特异性避孕疫苗,用基因工程技术构建重组质粒pPIC9K-(略)hCGβ-(略)氏毕赤酵母(Pichia pastoris)中表达重组抗原pZP3α-hCGβ-CTP.方法:根据pZP3α全长和hCGβCTP编码的DNA序列设计两对引物,通过部分重叠聚合酶链式反应(overlapping PCR),扩增出pZP3α-hCGβ-CTPDNA片断,克隆到载体质粒pPIC9K中,然后导入大肠杆菌DH5α,用PCR和双酶切反应鉴定重组质粒,并用DNA测序仪对重组质粒测序,构建好的重组质粒pPIC9K-pZP3α-hCGβ-(略)打孔方法转入巴氏毕赤酵母,用缺组氨酸的MD平板筛选阳性株,并在含G418的YPD培养基中筛选多拷贝插入菌株,用甲醇诱导表达,鉴定表达产物.结果:3步PCR扩增出pZP3α-hCGβ-CTPDNA片段(略)质粒pPIC9K的克隆位点,获得重组pPIC9K-pZP3α-hCGβ-CTP表达质粒,测序结果显示插入序列与设计预期完全一致.转化嗜甲醇酵母获得耐受4mg(略)18的菌株,经SDS-PAGE电泳和Western blotting检测表明其...
Aim: For the purpose of ma(omitted)ontraception vaccine pZP3 a -hCG P(omitted)5 which has multiple specific epitopes, use gene engineering technology to recombinan(omitted) pPIC9K-pZP3 a -hCG P-CTP109-145 and express this(omitted)in methylotrophic yeast Pichia pastoris. Methods: The two pairs of designed primers were based on pZP3 a and hCG P-CTP109-145 cDNA sequences. The pZP3 a -hCG P -CTP109-145 chimera was amplifiled by overlapping PCR. The chimera was cloned into pPIC9K pl(omitted)transformed into...
目录:
中文摘要第6-7页
英文摘要第7页
一 前言第8-15页
  · 避孕疫苗研究的历史和现状第8-14页
  · 本研究的目的第14-15页
二 实验材料和试剂第15-18页
  · 主要仪器第15页
  · 材料和主要试剂第15-18页
三 实验方法第18-23页
  · 研究所有的常规方法见附录2第18页
  · 重组质粒pPIC9K-pZP3α-hCGβ-CTPI的构建第18-20页
  · 重组抗原pZP3α-phCG-CTP在酵母细胞(Pichia pastoris)中的表达第20-23页
四 实验结果第23-28页
  · pZP3α-hCGβ-CTP的合成的结果第23页
  · 重组质粒pPIC9K—pZP3α-hCGβ-CTP的构建与鉴定的结果第23-26页
  · 重组抗原pZP3α-hCGβ-CTP在酵母的表达的结果第26-28页
五 讨论第28-33页
  · 本研究的意义第28页
  · 重组质粒的构建结果分析第28-29页
  · 酵母表达蛋白的结果分析第29-32页
  · 结论第32-33页
六 附录第33-42页
  · 各种试剂、培养基的配方第33-38页
  · 常规实验方法第38-42页
七 参考文献第42-49页
八 在校期间发表论文情况第49-50页
九 致谢第50页
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