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sIL-16在大肠杆菌中的表达及活性测定
中文名称: sIL-16在大肠杆菌中的表达及活性测定
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论文编号: 3687842收藏本论文】【我的收藏】【我要投稿
英文名称: The Expression of sIL-16 in E.coli and Its Activity Analysis
学位类型: 硕士毕业论文
作者: 涉及隐私,隐去***  作者本人请参看权力声明>>
导师: 涉及隐私,隐去***
毕业学校: 涉及隐私,隐去***
专业: 生物化学与分子生物学
毕业年份: 涉及隐私,隐去***
关键字: 分泌性白细胞介素16 重组白细胞介素16 原核表达 纯化 活性测定 淋巴细胞 高效表达载体
简介目录: 点击此处 免费索取本论文简介和目录>>
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论文简介:用PCR法扩增本室保存的sIL-16 cDNA片段,选择NdeI和XhoI两个酶切位点定向插入含T7启动子同时带有6个组氨酸序列表达标签的载体pET28a(+)中构建重组质粒pET-sIL16,得到阳性克隆后转化大肠杆菌BL21(DE3),筛选表达菌株.观察不同温度下菌株经IPTG诱导表达产物可溶情况,选择最适宜温度进行表达.表达产物超声碎菌,离心后上清过Ni<'2+>鏊和层析柱,根据咪唑梯度变化进行表达产物的纯化.表达产物与淋巴细胞共同孵育一段时间,通过流式细胞仪观察它对细胞表面某些分子表达的影响和它对细胞生长的刺激作用.结论:从培养的淋巴细胞提取IL-16 RNA,经逆转录成cDNA后,利用高效表达载体pET28a(+)在sIL-16的N端添加了6个组氨酸的标签,同时受控于T7启动子的调控下,使蛋白得以高效表达并方便纯化.进行低温诱导减弱蛋白分子表面疏水基的相互作用,有利于蛋白正确折叠形成可溶性天然的空间结构.与rIL-16共孵育的PBMC表面IL-2R的表达水平比未经rIL-16处理的细胞增高了18.54﹪,说明rIL-16的刺激活化了pBMC.
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