免费论文
收费论文
发表论文
我要投稿
设为首页 招标网
联系我们
经济学|管理学|法学|计算机|医学|教育|文学|政治|艺术|哲学|更多 经济学|管理学|法律|计算机|医学|教育|文学|政治|艺术|哲学|更多
 论文搜索
  推荐服务: 论文发表 收费论文
期刊论文格式
毕业论文格式
期刊论文范文
毕业论文范文
论文致谢
毕业论文答辩
开题报告
论文选题
英文摘要书写
辣椒疫霉(Phytophthora capsici)致病遗传变异、多聚半乳糖醛酸酶基因克隆及表达特性研究
中文名称: 辣椒疫霉(Phytophthora capsici)致病遗传变异、多聚半乳糖醛酸酶基因克隆及表达特性研究
全文提供: 购买充值卡,就可下载本篇论文全文  
论文编号: 3102233收藏本论文】【我的收藏】【我要投稿
英文名称: Pathogenicity and Genetic Variation, Cloning and Expression of Polygalacturonase Genes from Phytophthora Capsici
学位类型: 博士毕业论文
作者: 涉及隐私,隐去***  作者本人请参看权力声明>>
导师: 涉及隐私,隐去***
毕业学校: 涉及隐私,隐去***
专业: 植物病理学
毕业年份: 涉及隐私,隐去***
关键字: 辣椒疫霉 RAPD 多聚半乳糖醛酸酶 pg基因克隆 基因克隆 表达特性 辣椒疫霉菌
简介目录: 点击此处 免费索取本论文简介和目录>>
全文提供: 购买充值卡,就可下载本篇论文全文  

       论文发表:快速、低价、包过!发表论文就找论文天下

论文简介:辣椒疫病是一种世界性土传病害,严重影响我国及世界各国的农业生产,造成巨大的经济损失。该病由辣椒疫霉菌(phytophthora capsici)所引起。辣椒疫霉菌是一种土传卵菌,以卵孢子或厚垣孢子在土壤病残体中越冬,可以存活数月甚至更长时间,在适宜条件下引起青椒茎腐、根腐和枯萎;寄主范围广,可以侵染辣椒、西葫芦、黄瓜、番茄等9科20多种作物。 目前,对于辣椒疫病的防治主要采用化学防治,而培育抗病品种效果不稳定,原因之一是辣椒疫霉具有较强的变异能力。因此,寻找探索辣椒疫霉菌重要的致病因素成为科学家研究的对象。其中,多聚半乳糖醛酸酶(PG)是许多植物病原菌的致病因子,在植物发病过程中起重要作用。本研究以辣椒疫霉为研究对象,对来自我国不同地区的辣椒疫霉进行了群体遗传学研究,并分析了其致病力与地理位置、菌株起源的关系。筛选多聚半乳糖醛酸酶活性最高的辣椒疫霉菌株,并构建了其基因组DNA文库,应用Pool PCR方法分离和克隆了7个pg基因。构建了pcpg2基因的真核和原核表达载体,通过诱导表达获得重组蛋白,并制备了特异性抗体;应用RT-PCR和Northern.Blotting方法分析了其在辣椒体内的表达情况;纯化真核表达蛋白接种辣椒叶片,观察其发病症状。主要研究内容如下: 2004-2005年,从我国山东、陕西、湖北、浙江、广东、四川、云南等地采集辣椒疫病病株及病土分离鉴定辣椒疫霉菌株。通过利用12个随机引物对来自我国7个不同地理区域的56个辣椒疫霉菌株进行RAPD分析,探索了我国主要辣椒种植区间的辣椒疫霉菌的遗传分化关系。结果表明:我国主要辣椒种植区的辣椒疫霉菌具有较丰富的遗传多样性;并将供试56个菌株划分为8个基因型(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ、Ⅶ、Ⅷ),结合我国不同地理区域辣椒疫病发病情况,提出我国辣椒疫霉菌基因型的划分除少数与地理区域有关外,其它绝大多数地区的辣椒疫霉菌基因型的划分与地理来源无直接的相关性。 利用游动孢子悬浮液浸根法测定辣椒疫霉菌株致病性,发现受试31菌株被划分为非致病型、弱致病型和强致病型的三种致病型。对其进行RAPD分析发现,不同致病型的辣椒疫霉具有丰富的遗传多样性,并划分为两个大的基因型,但与菌株的致病型没有显著的关系。上述试验结果说明,来自不同地区的辣椒疫霉菌存在明显的致病型分化,并有丰富的基因型,但两者之间无明显的对应关系。利用RAPD技术对来自我国地区的致病性和非致病性辣椒疫霉菌株进行群体遗传多样性分析,受试致病性和非致病性辣椒疫霉菌株分别聚为一组,但其中两个非致病性菌株与致病性菌株聚为一组。ITS(ITS1-5.8SrDNA-ITS2)序列分析结果表明,受试致病性和非致病性辣椒疫霉菌株分别聚为一个组。但非致病性辣椒疫霉菌的群体遗传多样性比致病性的要高,这说明致病性菌株可能是单系群起源。此外,致病性和非致病性辣椒疫霉菌株遗传多样性与其致病性没有明显的相关性。上述研究表明,我国辣椒疫霉菌存在丰富的遗传多样性及明显的致病分化现象,但两者之间无直接的相关性。 采用DNS(3,5-二硝基水杨酸)分光光度法测定辣椒疫霉菌的多聚半乳糖醛酸酶(PG)活性,并构建基因组文库。利用Pool PCR法分离克隆Pg基因,对其结构特征进行分析。结果发现,辣椒疫霉菌复壮后PG活性高于复壮前,且致病性菌株的PG活性高于非致病性菌株,构建了PG活性最高最稳定的菌株的基因组DNA文库。从文库中共分离克隆了7个pg基因,其GenBank注册号分别是DQ365796、DQ415987、D0415988、EF558848、EF558847、EF558846及EF558845。对其序列和蛋白结构进行分析发现, 7个pg基因具有很高的同源性,并具有不同数目的糖基化位点。所编码的蛋白具多聚半乳糖醛酸酶的保守序列和蛋白活性位点(NNYCSGGHGISIGS),其蛋白结构也具明显的相似性。本研究发现,辣椒疫霉的pg基因与卵菌的pg基因聚在一起,亲缘关系最近,进一步证明了卵菌在自然界中的分类地位。 根据已经克隆的pcpg2基因的序列,设计特异性引物,PCR扩增其成熟肽片断。重组至酵母分泌型表达载体pPIC9K,构建成重组表达载体pPIC9K-pcpg2,转化至大肠杆菌JM109中,筛选得到阳性克隆。重组质粒线性化后转化毕赤酵母GS115感受态细胞,经过G418筛选和PCR.扩增转化子基因组筛选,得到数株基因工程酵母菌。SDS-PAGE分析发现,目的蛋白与预期蛋白的分子量相吻合。通过将酵母分泌的PG蛋白免疫家兔,制备特异性抗体。Western-blotting分析结果表明,表达的目的蛋白与制备的抗体在37KDa处特异性地结合。总之,pcpg2基因在酵母中得到了表达,并制备了特异性抗体。 根据pcpg2已知序列设计特异性引物,PCR扩增其成熟肽序列。重组至原核表达载体pET-22b(+),构建成重组表达载体pET-pcpg2,转化至大肠杆菌BL21(DE3),筛选得到阳性克隆用IPTG进行诱导表达。SDS.PAGE电泳显示在37KDa处有一特异性蛋白带出现,Western-bloaing检测表明已经成功表达了融合蛋白,更验证了已制备的抗体的特异性。培养辣椒疫霉菌,接种4-6叶期辣椒叶片。根据pcpg2的序列设计特异性引物,RT-PCR检测接种叶片内.pcpg2的表达情况。结果发现,接种后pcpg2表达量随着时间延长而加强,第7天pcpg2表达量最高。设计引物,PCR扩增片断以制备探针,Northern-blotting结果表明,pcpg2基因在接种辣椒叶片内得到表达,而未接种叶片则没有表达。 纯化真核表达蛋白PG2,提取辣椒叶片细胞壁,DNS法测定活性结果表明,纯化的PG2对辣椒叶片细胞壁具有一定的活性。利用针刺法将纯化的PG2接种4-6叶期辣椒叶片,发现接种PG2的叶片出现病斑,表现出发病症状,而接种无菌水的叶片则没有表现症状。这表明pcpg2可能是编码辣椒疫霉多聚半乳糖醛酸酶基因家族中的致病基因之一。
本类相关论文:
·辣椒抗疫病相关基因的分析及QTL定位
辣椒疫霉论文 RAPD论文
·辣椒疫霉菌(Phytophthora caps
·辣椒疫霉病生防芽孢杆菌快速筛选及菌株B006的
·辣椒疫霉对双炔酰菌胺抗药性风险评估及抗药性生理
·高效辣椒遗传转化体系构建及其在辣椒功能基因组研
·辣椒应答疫霉的转录谱分析及相关候选抗病基因的c
·福建省杨梅不同品种的RAPD分析
·乌龙茶种质资源的RAPD分析与离体保存
·寄主胁迫下小菜蛾种群适应性及遗传变异的研究
·红麻遗传连锁图谱构建及重要性状基因定位与SCA
·三角叶黄连的遗传多样性研究
多聚半乳糖醛酸酶论文 基因克隆论文
·高压脉冲电场对多聚半乳糖醛酸酶活力及结构作用研
·利用病毒诱导的基因沉默技术探讨番茄PG与乙烯关
·柑橘绿霉菌多聚半乳糖醛酸酶基因的克隆和功能分析
·玉米纹枯病菌内切多聚半乳糖醛酸酶的基因克隆、表
·陆地棉细胞质雄性不育恢复基因的遗传定位及GhP
·甜菜亚硝酸还原酶(NiR)基因的克隆及其表达分
·玉米丝氨酸羧肽酶基因(ZmSCP)的克隆及功能
·RML脂肪酶基因在毕赤酵母中的高效表达与发酵优
·不同真核载体表达人神经生长因子
·草鱼促性腺激素基因原核表达及多克隆抗体的制备
表达特性论文 辣椒疫霉菌论文
·兴安落叶松转录因子CBF1和Actin基因的克
·中华蜜蜂(Apis cerana cerana
·小麦中3个水分胁迫相关基因的克隆与表达
·普通小麦春化基因的克隆及表达特性分析
·TaMBDs在小麦叶片中的表达特性及原核表达载
·帕克素对辣椒疫霉菌和枯草芽孢杆菌作用机理的研究
·辣椒疫霉菌生理小种鉴定及其化学防治效果分析
·辣椒疫霉(Phytophthora capsi
·辣椒疫霉菌生理小种及其抗性研究
·辣椒抗疫病的生化和分子标记研究
  推荐期刊投稿
·控制理论与应用
·北京化工大学学报(社会科学版)
·黑龙江水利科技
·今日海南
·中华眼底病杂志
·中国石油和化工
·水利电力科技
·重庆师范大学学报(哲学社会科学版
·西藏科技
·深圳特区科技
 
·衡阳通讯
·河北软件职业技术学院学报
·中华纸业
·科技潮
·给水排水
·中国管理科学
·高教发展与评估
·有机化学
·河南省政法管理干部学院学报
·口岸卫生控制
 
·北京大学学报(哲学社会科学版)
·世界核心医学期刊文摘.心脏病学分册
·吉林医药学院学报
·癌症
·全明星
·河南科技大学学报(医学版)
·甘肃社会科学
·山东大学学报(理学版)
·中华散文(我的故事)
·化工设备与管道
   免费论文
公共管理 | 法学 | 理学 | 医药学
政治 | 社会学 | 文学 | 艺术 | 哲学
工学 | 计算机 | 文化 | 英语论文
经济学 | 财政 税收 | 证券金融
管理学 | 会计审计 | 工商管理 | 教育
财务管理 | 论文写作指导 | 应用文
   收费论文
马列毛邓 | 哲学宗教 | 社会科学
政治法律 | 军 事 | 经 济
文化科学教育体育 | 语言文字
文学 | 艺术 | 历史地理 | 自然科学
数理化 | 天文 | 生物科学 | 医药卫生
农业科学 | 工业技术 | 交通运输
航空航天 | 环境安全
   浏览历史

联系论文网 | 收费论文 | 发表论文 | 论文翻译 | 友情链接 | 全部分类 | 网站地图 | 期刊导航
版权所有 2008-2018 论文天下 www.lunwentianxia.com 京ICP备08104503号