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肉仔鸡氧化应激模型的研究
中文名称: 肉仔鸡氧化应激模型的研究
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论文编号: 3102144收藏本论文】【我的收藏】【我要投稿
英文名称: Study of Oxidative Stress Model in Broiler Chicks
学位类型: 博士毕业论文
作者: 涉及隐私,隐去***  作者本人请参看权力声明>>
导师: 涉及隐私,隐去***
毕业学校: 涉及隐私,隐去***
专业: 动物营养与饲料科学
毕业年份: 涉及隐私,隐去***
关键字: 肉仔鸡 肌卫星细胞 氧化应激模型 DEX ACTH Ru486 可的松 Ca~(2+)
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论文简介:本文首先研究了激素处理(注射或口服)对肉仔鸡生产性能、消化能力、免疫功能和肉质的影响,建立了急性和慢性动物营养应激模型:研究了DEX对肌卫星细胞的影响,建立了细胞氧化应激模型;进一步研究了激素对卫星细胞内钙离子浓度的影响.研究表明,三种激素处理的应激模型均能引起肉仔鸡肉质、激素、细胞活性等的变化,产生氧化应激,激素可通过细胞内钙离子途径的转导引起肌肉细胞的代谢变化,从而影响肉质.本研究可为研究应激对肉仔鸡的影响及其机理提供方法学借鉴.现摘要如下: 1、急性氧化应激动物试验模型的研究选择2ld体重相近的健康肉仔鸡公雏210只,随机分成7组,每组3个重复,每重复10只.处理分别为C(对照组)、S(生理盐水注射1 mL/只)、s+R(s+Ru486)、D(6 mg/kg BW)、D+R(D+Ru486)、A(6 IU/kg.BW)、A+R(A+Ru486),Ru486剂量为50 mg/kg BW;40d时重复上述过程.结果表明: ⒈注射ACTH、DEX和PSS均显著影响了肉品品质(pH值降低、滴水损失和肉品剪切强度增加),同时注射Ru486后肉品质的不正常状况得到了缓解,但均未恢复到未注射状态;腿肌的pH值、滴水损失、剪切强度均显著高于胸肌(P<0.01);29d屠宰的肉品pn值、滴水损失均显著高于40d屠宰(P<0.01);40d屠宰鸡肌肉的剪切强度显著高于29d(P<0.01);随着处理后屠宰时间的延长,肌肉pn值降低、滴水损失和剪切强度增加趋势明显.这些结果表明,40d肉仔鸡,DXM(6 mg/kg BW)或ACTH(6IU/kg BW)注射处理后8h,可用于模拟研究氧化应激对肉质的影响. ⒉注射DEX、ACTH和PSS后组织(胸肌、腿肌、肝脏和心肌)匀浆中蛋白含量、MDA显著或极显著增加,GSH-Px和SOD显著或极显著降低;同时注射Ru486后这种组织的不正常氧化还原状态得到缓解,GSH-Px和SOD显著高于、蛋白含量和MDA显著低于仅注射DEX、ACTH和生理盐水组,但仍未恢复到对照组水平.注射处理后4h、8h、12h和24h屠宰鸡氧化还原状态的测定结果表明,不同组织对同一指标的反应有别,以8h~12h为合适的激素处理后的作用时间.肌肉注射DEX和ACTH可用于模拟动物的急性组织氧化应激状态. ⒊注射DEX和ACTH后,与其它所有处理组相比,血液'FAOC、GSH-Px和SOD均降到了最低,显著低于对照组(P<0.01),二者差异不显著(P>0.05):CAT、MDA、CK和AfT则升到了最高,显著高于对照组(P<0.01),两种处理差异不显著(P>0.05).同时相应注射Ru486后,血液TAOC、GSH-Px和SOD升高,血液CAT、MDA、CK和AST低,与相应的不注射组均差异显著(P<0.01),但仍高(TAOC、MDA、CK和AST)或低于(GSH-Px、SOD、CAT)对照组(P<0.01). 2、慢性氧化应激动物试验模型的研究选择320只21dAA肉仔鸡随机分为4个处理组,每组设8个重复,每个重复10只试鸡.Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ组分别饮用加有0、10、20和30 mg/L 的可的松水,自由饮水和采食,试验期10d.结果表明: ⒈ 可的松饮水对肉鸡FC、ADG、F/G均无显著影响(P>0.05):血液生化分析表明,可的松饮水对血液HDL、LDL、CHOL、TG、肌酐含量无显著影响(P>0.05),但20和30mg/L可的松饮水10d肉鸡血浆TP含量(P<0.05)和尿酸含量(P<0.01)显著升高,30mg/L 可的松饮水1d血浆AST活性显著升高(P<0.05).20和30mg/L可的松饮水组,显著降低了3~4d日粮CP、EE表观代谢率,显著降低了1~2、3~4d的.Ash的表观代谢率(P<0.05).结果表明,20和30mg/L可的松饮水,在饮水的第3~4d即影响到了日粮CP、EE和灰分的消化率,10d时血液TP、尿酸含量升高. ⒉ 可的松饮水极显著地(P<0.01)增加了胸肌、腿肌6d和lOd的滴水损失;显著升高了胸肌pH1(P<0.05),对腿肌无显著影响;pH24.胸肌除3d第Ⅱ组显著增加外(P<0.05),其他均无明显变化(P>0.05),但腿肌有增加的趋势(P>0.05);可的松饮水对胸肌、腿肌的相对重量无显著影响(P>0.05):对胸肌含水量亦无显著影响(P>0.05),胸肌蛋白有降低的趋势,显著降低了2、6d胸肌脂肪含量(P<0.05),可的松饮水显著降低了腿肌6d第Ⅲ组水分含量(P<0.05),极显著降低了6d第Ⅱ、Ⅲ组蛋白的含量(P<0.01),显著降低了2d第Ⅲ组和6dⅡ、Ⅲ组脂肪含量(P<0.05).这表明可的松饮水对肌肉发育的影响不显著,但显著影响肌肉的营养组成. ⒊ 处理3d,第Ⅳ组鸡皮质酮含量显著高于对照组(P<0.05):血糖浓度在处理1-2d明显升高,处理2d显著(P<0.05)高于对照组;T<,3>先降低后升高,1~2d均极显著高于(P<0.01) 对照组,第3d T<,4>极显著(P<0.01)高于对照组;对应激氧化状态的影响为,MDA在1~3d和6d时均显著(P<0.05)高于对照组,SOD第1~3d活性降低,GSH-Px活性处理后1~3d均显著(P<0.05)低于对照组,TAOC第2d显著降低(P<0.05),CK在第6d时显著升高 (P<0.05).这表明30mg/L 可的松饮水3d成功地在肉鸡体内诱发了氧化应激. ⒋ 整个试验期,可的松饮水对心脏、肝脏、胸腺、法氏囊的相对重量均无明显影响(P>0.05):对脾脏相对重量的影响,除第2d显著差异外(P<0.05),对其他时间均无显著影响(P>0.05);可的松饮水对腹脂和肝脏含水量均无显著影响(P>0.05),肝脏脂肪含量在试验处理10d左右极显著增加(P<0.01);可的松饮水显著增加了试验处理2~3d心脏MDA含量,降低了第10d MDA含量(P<0.05),极显著增加了(P<0.01)处理第1d后GSH-Px含量,降低了处理1d后SOD含量(P<0.05);可的松饮水显著增加了试验处理2~3d肝脏MDA含量,处理10d时处理剂量最小的第Ⅱ组MDA含量显著高于对照组,对GSH-PX、SOD的含量的影响明显,除处理第6d时显著高于对照组外,在整个试验期内均显著低于对照组.这表明可的松饮水对组织器官发育的影响较小,而1~3d对心、肝脏的过氧化状态影响显著. 3、肌肉细胞氧化应激模型的研究用显微镜(观察细胞形态、活细胞个数、台盼蓝染色)、MTT试验、NBT还原试验、脂质过氧化等试验,研究了不同浓度DEX对细胞活性的的影响,并用维生素C(VC)对此模型进行了验证,结果表明: ⒈显微镜下可明显看出,活性SCs随DEX浓度的增加而减少明显,DEX浓度大于0.625g/L.几乎未见活的SCs存在;DEX浓度小于0.15625 g/L则对SCs的影响较小,腿肌SCs的抗DEX的能力较大. ⒉随着DEX浓度的增加,培养基中的活细胞个数显著减少,台盼蓝蓝染率显著增加,且两项指标均与DEX浓度呈一定的函数关系(活细胞数(Y×10<'4>)=35.186e<'-0.7821x>;细胞蓝染率(死亡率,Y,﹪)=44.039X<'-0.3492>,X为DEX浓度(g/L,).细胞培养液中添加DEX显著影响了胸肌和腿肌SCs的相对存活率,随DEX浓度增加,细胞存活性呈幂函数曲线降低(胸肌:y=14.944X<'-0.6082>;DEX+VC:y=19.642X<'-0.4663>;腿肌:y=17.091X<'-0.5193>;DEX+VC:y=40.418X<'-0.2536>;其中X为DEX剂量(g/L)、Y为SCs相对成活率(﹪)). ⒊DEX处理增加了肌肉细胞的膜脂质过氧化作用,使膜系统受到不同程度的过氧化损伤;肌细胞MDA相对生成量(Y)与DEX(x,g/L)之间呈幂函数关系:胸肌SCs Y=1.5723x<'0.0983>;腿肌SCs Y=1.3213x<'0789>.随DEX浓度的增加(x,g/L),校正后的NBT被还原量(Y,吸光度值)显著增加,说明氧自由基量增加明显,自由基随DEX浓度升高而升高,二者呈幂函数关系(胸肌和腿肌分别为:Y=0.8328x<'0.457>和Y=0.3898x<'0.334>). ⒋培养基中添加维生素C改善了肌肉细胞的存活率,随DEX浓度增加,维生素C的改善作用降低. 4、DEX对鸡胸、腿肌卫星细胞中Ca<'2+>影响用LEICA TCS SP2 SE激光扫描共聚焦显微镜(Laser Scanning Confocal Microscope,LSCM简称共焦显微镜)和钙离子指示剂Fluo-3/AM标记技术测定了单个细胞内钙离子浓度在不同浓度DEX处理后细胞内的动态变化,以便确定DEX能否激发钙离子信号转导系统,结果表明:用不同浓度.DEX处理胸肌和腿肌SCs,细胞内游离钙离子浓度均有相应的变化,随着DEX浓度的降低,两种来源的SCs内钙离子浓度的最大值逐渐降低,达到最大值需要的时间不断延长,细胞内钙离子浓度恢复到静止状态需要的时间延长:胸肌SCs对DEX处理的反应更为敏感;10<'-4>~10<'-6>mol/L DEX均能引起肌细胞内钙离子浓度增加;细胞外DEX可以通过作用于肌肉细胞内钙离子信号转导系统,而影响肌肉细胞代谢.
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