免费论文
收费论文
发表论文
我要投稿
设为首页 招标网
联系我们
经济学|管理学|法学|计算机|医学|教育|文学|政治|艺术|哲学|更多 经济学|管理学|法律|计算机|医学|教育|文学|政治|艺术|哲学|更多
 论文搜索
  推荐服务: 论文发表 收费论文
期刊论文格式
毕业论文格式
期刊论文范文
毕业论文范文
论文致谢
毕业论文答辩
开题报告
论文选题
英文摘要书写
幽门螺杆菌omp22、hpaA及融合基因克隆与表达产物免疫保护作用研究
中文名称: 幽门螺杆菌omp22、hpaA及融合基因克隆与表达产物免疫保护作用研究
全文提供: 购买充值卡,就可下载本篇论文全文  
论文编号: 3102126收藏本论文】【我的收藏】【我要投稿
英文名称: Cloning of Helicobacter Pylori omp22, hpaA and omp22-hpaA Fusion Gene and Evaluation of Immune Protective Efficacy of Their Expression Products
学位类型: 博士毕业论文
作者: 涉及隐私,隐去***  作者本人请参看权力声明>>
导师: 涉及隐私,隐去***
毕业学校: 涉及隐私,隐去***
专业: 流行病与卫生统计学
毕业年份: 涉及隐私,隐去***
关键字: 幽门螺杆菌 omp22-hpaA融合基因 蛋白表达 免疫原性 免疫保护 重组疫苗 消化性溃疡
简介目录: 点击此处 免费索取本论文简介和目录>>
全文提供: 购买充值卡,就可下载本篇论文全文  

       论文发表:快速、低价、包过!发表论文就找论文天下

论文简介:幽门螺杆菌(Helicobactet pylori,Hp)是目前发现唯一能够在人胃内定植、生存的微需氧革兰氏阴性杆菌。Hp是世界性分布的病原菌,它的感染是目前人类发生率最高的慢性细菌感染之一。现已确认,Hp感染是消化性溃疡和慢性胃炎的重要病因,并与胃癌和胃淋巴瘤的发病密切相关,流行病学调查发现Hp感染还与冠心病、糖尿病、支气管炎等关系密切。因此,研制有效的预防和治疗疫苗来预防控制Hp感染,不失为一种简便、经济、高效的途径。 黏附素(HpaA)是暴露于Hp细菌表面的鞭毛鞘膜蛋白,也是该细菌主要的粘附因子之一,其核苷酸和氨基酸序列高度保守,能使Hp紧密粘附于胃上皮细胞。Hp感染病人血清中出现的HpaA抗体能与HpaA蛋白发生免疫反应。Hp基因组中含有34个功能未明的外膜蛋白基因,一些实验研究表明,部分外膜蛋白分子具有良好的免疫活性,其中Hp外膜蛋白Omp22,已有研究表明其能够分泌表达于细菌表面,并能引起Th1细胞较高的免疫反应,有可能成为幽门螺杆菌疫苗研究的良好免疫候选抗原。Hp疫苗研究已取得了一定成绩,但一直令学者们遗憾的是单一抗原成分免疫动物时,获得的保护率均不理想,为了克服单种抗原免疫性较弱的不足,有学者建议将多种抗原成分联合起来制作疫苗,增强免疫效果、提高免疫保护率。 本课题研究旨在对临床分离株Hp MEL-HP27的omp22基因和hpaA基因进行克隆,并通过氨基酸接头构建omp22-hpaA融合基因,生物信息学软件分析两个基因融合前后所表达蛋白的生物学特性;分别构建表达omp22、hpaA及其融合基因的原核表达系统,对表达蛋白进行纯化和免疫原性鉴定;通过动物实验评价所表达蛋白作为Hp疫苗抗原的免疫保护效果,为筛选高效的Hp疫苗研究奠定基础。 实验方法 1.幽门螺杆菌omp22、hpaA基因克隆和生物信息学分析及其融合基因的构建采用PCR方法,以本研究室从郑州胃炎患者胃部分离的Hp菌株MEL-HP27的染色体DNA为模板,扩增出omp22、hpaA基因片段,分别将他们插入克隆载体pBlueScript Ⅱ SK(-),转化大肠杆菌,经酶切和特异PCR 方法鉴定出阳性重组载体,对插入目的片段进行测序。应用分子生物学软件Omiga2.0和DNAstar对Hp MEL-HP27的Omp22、HpaA蛋白的生物化学特性进行分析,预测他们的柔韧性和细胞表位区域,并预测Omp22、HpaA和Omp22-HpaA的二级结构、疏水性、抗原性等,比较两基因融合前后的变化,选择合适的氨基酸接头。去除omp22基因的终止密码子和hpa4基因的起始密码子,以重叠延伸PCR方法扩增出带柔韧接头编码序列的融合基因omp22-hpaA,对重组质粒进行测序鉴定。 2.幽门螺杆菌omp22、hpaA和omp22-hpaA融合基因原核表达载体的构建及工程菌蛋白表达条件的初步优化分别将omp22、hpaA和omp22-haaA从克隆载体中双酶切后,回收目的DNA片段插入原核型表达载体pMAL-c2X,构建目的蛋白基因与大肠杆菌麦芽糖结合蛋白基因融合表达的重组质粒,转化大肠杆菌TB1感受态细胞,氨苄青霉素抗性、蓝-白斑试验筛选阳性克隆,限制性内切酶酶切及特异PCR鉴定出阳性重组质粒。采取不同的诱导时机、诱导剂浓度、诱导时间等条件诱导重组菌表达,表达产物处理后经SDS-PAGE电泳,分析目的蛋白在不同条件下的表达水平,选择目的蛋白适宜的表达条件。 3.Omp22、HpaA和Omp22-HpaA融合蛋白的纯化及其免疫学活性研究选取适宜条件对重组菌进行大量诱导,诱导表达产物经超声粉碎,超声上清经初步盐析后,应用直链淀粉亲和层析柱进行纯化,Western blot鉴定目的蛋白纯化前后的免疫反应性。凝胶扫描法分析蛋白质纯度(SynGene,USA),Bradford法测定蛋白质含量。用纯化的Omp22、HpaA、Omp22-HpaA和Hp菌体抗原免疫小白鼠获得免疫血清,用制备免疫血清与重组蛋白进行Western blot反应,检测重组蛋白的免疫学活性。 4.幽门螺杆菌外膜蛋白Omp22、黏附素HpaA和Omp22-HpaA融合蛋白免疫保护作用的动物实验研究以纯化的Omp22、HpaA、Omp22-HpaA、UreB为抗原,大肠杆菌不耐热肠毒素无毒突变体mIX63为黏膜佐剂,经口免疫昆明小鼠,每周1次,共免疫4次,并设立免疫佐剂和PBS对照组。末次免疫1周后,各组小鼠均用新鲜培养的Hp(NCTC11637)进行攻击感染,共攻击感染2次,间隔10h。末次攻击2周后处死小鼠,取小鼠胃组织分别作尿素酶定性试验和半定量试验、Hp培养、涂片Gram’s染色镜检和组织学检查,检测免疫接种对Hp在小鼠胃内定植的影响,评价重组抗原与佐剂组合的免疫保护效果。 5.统计学分析应用SAS 9.13统计分析软件包进行实验数据分析。计量资料的比较采用单因素方差分析,均数间两两比较采用最小显著差异法(Least significant deviation,LSD),计数资料分析采用X<'2>检验或Fisher's确切概率法,检验标准以P<0.05为差异有显著性。 结论 1.从Hp郑州分离株MEL-HP27基因组DNA中成功克隆到外膜蛋白omp22基因,该基因已被GenBank收录,基因编号为DQ499023,是中国向GenBank提交的第一个omp22基因序列,也是GenBank第四个收录的Hp omp22基因;同时还克隆到MEL-HP27黏附素hpaA基因,该基因已被GenBank收录,基因编号为DQ353891。 2.采用重叠延伸PCR方法,通过柔韧氨基酸接头连接成功构建了omp22-hpaA融合基因,有效地保持Omp22、HpaA单体蛋白原有的抗原活性中心和生物学活性。 3.利用基因重组技术构建了omp22、hpaA和omp22-hpaA融合基因的原核表达系统pMAL-c2X-omp22-TB1、pMAL-c2X-hpaA-TB1、pMAL-c2X-omp22-hpaA-TB1,能够稳定高效表达重组蛋白rOmp22、rHpaA和rOmp22-HpaA。 4.纯化的重组蛋白rOmp22,研究发现具有良好的免疫原性和免疫反应性,为研究幽门螺杆菌疫苗发现新的有价值的候选抗原提供了有意义的依据。 5.制备的重组蛋白rHpaA、rOmp22-HpaA纯度高、并具有良好的免疫原性和免疫反应性,可以作为发展Hp基因工程亚单位疫苗的候选组分和免疫检测诊断候选抗原。 6.应用小鼠动物模型,研究评价了rOmp22、rHpaA、rOmp22-HpaA、rUreB和rOmp22、rHpaA两种抗原单纯灌合后联合黏膜免疫佐剂经口免疫小鼠的免疫保护效果。
本类相关论文:
·胃内菌群对H.pylori定植的影响和双歧杆菌
·幽门螺杆菌CagA~+菌株对胃上皮细胞间隙连接
·重组人抗幽门螺杆菌尿素酶B亚单位sIgA分子的
·原发性十二指肠胃反流在健康人中的表现及反流物成
·十二指肠胃反流的临床、病理学分析及清热理气冲剂
·幽门螺杆菌分泌蛋白粗提物对胃酸分泌及胃上皮细胞
·胃粘膜相关淋巴组织淋巴瘤临床、内镜、病理特征分
·TNF基因多态性与胃十二指肠疾病Hp感染相关性
·H.pylori 23S rRNA基因突变的检
·人幽门螺杆菌蒙古沙鼠适应性定植相关蛋白的鉴定及
幽门螺杆菌论文 蛋白表达论文
·幽门螺杆菌iceA基因相关的致病机制
·反流性食管炎与Hp感染证候、证素分布相关性研究
·中药疏肝健脾清热化湿法对西药抗HP疗效的干预研
·健脾活血汤治疗脾胃虚弱型慢性胃炎的临床疗效观察
·幽门螺杆菌感染与慢性阻塞性肺病(COPD)的关
·离子通道相关蛋白FXYD6的真核表达和功能区的
·肠道病毒EV71 VP1基因的优化和免疫原性的
·猪源TTV:分子流行病学,全长序列分析及感染性
·猪细小病毒四型的初步研究
·猪干扰素诱导蛋白IP-10和Mx1克隆、表达及
免疫原性论文 免疫保护论文
·化疗介导肾癌细胞免疫原性表达变化的体外研究
·小剂量放疗介导人肾透明细胞癌786-0免疫原性
·肠道病毒EV71 VP1基因的优化和免疫原性的
·副猪嗜血杆菌hhdA基因缺失株的构建及胞外丝氨
·L-CVN的中试发酵及其初步毒性和免疫原性研究
·弓形虫代谢分泌抗原和表面蛋白1抗原表位研究
·日本血吸虫核糖体蛋白SjRPS4基因及蛋白联合
·IBDV-VP2多表位串联基因的原核表达及表达
·西尼罗病毒E蛋白Ⅲ区的原核表达及其对西尼罗病毒
·三种肺炎链球菌表面蛋白联合诱导的特异性IgG抗
重组疫苗论文 消化性溃疡论文
·重组脂联素在非酒精性脂肪肝病中作用的初步探讨
·PfCP-2.9重组恶性疟疾疫苗Ⅰ期临床试验免
·狂犬病病毒糖蛋白—犬2型腺病毒重组疫苗生物安全
·幽门螺杆菌CagA基因克隆及表达
·重组牛亚洲Ⅰ型口蹄疫病毒疫苗的构效研究
·中医对消化性溃疡的认识
·大黄黄连泻心汤、理中丸对消炎痛型胃溃疡寒热证模
·胃脘痛(消化性溃疡)临床诊疗方案120例观察
·消化性溃疡中医体质特点的初步研究
·幽门螺杆菌感染与消化性溃疡并出血的关系
  推荐期刊投稿
·纯粹数学与应用数学
·搏击
·高等教育与学术研究
·山东食品发酵
·中国油画
·椰城
·中国有色冶金
·农村牧区机械化
·国防科技大学学报
·北京体育大学学报
 
·小学时代
·中国边疆史地研究
·骏马
·电站系统工程
·山西科技
·China's Tibet
·临床肿瘤学杂志
·河海大学常州分校学报
·建筑技术
·中共石家庄市委党校学报
 
·今日中学生
·旅游
·吉林医学
·法制与经济(下半月)
·中国校外教育(美术)
·华南农业大学学报(自然科学版)
·南方农村
·Journal of Integrati
·船舶
·陕西水利
   免费论文
公共管理 | 法学 | 理学 | 医药学
政治 | 社会学 | 文学 | 艺术 | 哲学
工学 | 计算机 | 文化 | 英语论文
经济学 | 财政 税收 | 证券金融
管理学 | 会计审计 | 工商管理 | 教育
财务管理 | 论文写作指导 | 应用文
   收费论文
马列毛邓 | 哲学宗教 | 社会科学
政治法律 | 军 事 | 经 济
文化科学教育体育 | 语言文字
文学 | 艺术 | 历史地理 | 自然科学
数理化 | 天文 | 生物科学 | 医药卫生
农业科学 | 工业技术 | 交通运输
航空航天 | 环境安全
   浏览历史

联系论文网 | 收费论文 | 发表论文 | 论文翻译 | 友情链接 | 全部分类 | 网站地图 | 期刊导航
版权所有 2008-2018 论文天下 www.lunwentianxia.com 京ICP备08104503号