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STK15基因在膀胱肿瘤中的表达及其单核苷酸多态性与膀胱肿瘤易感性的研究
中文名称: STK15基因在膀胱肿瘤中的表达及其单核苷酸多态性与膀胱肿瘤易感性的研究
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论文编号: 3102084收藏本论文】【我的收藏】【我要投稿
英文名称: Study on Expression of STK 15 Gene in Human Bladder Cancer and Relationship between Its Single Nucleotide Polymorphisms and Risk of Bladder Cancer
学位类型: 博士毕业论文
作者: 涉及隐私,隐去***  作者本人请参看权力声明>>
导师: 涉及隐私,隐去***
毕业学校: 涉及隐私,隐去***
专业: 外科学
毕业年份: 涉及隐私,隐去***
关键字: STK15 膀胱癌 单核苷酸多态 单核苷酸 修复基因 细胞株 基因靶向治疗
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论文简介:膀胱移行细胞癌是泌尿系统肿瘤最常见的恶性肿瘤,其中70%-80%为浅表性膀胱癌,95%为高危浅表性膀胱癌。膀胱癌像其他多数肿瘤,从正常向恶性细胞转化涉及到多个步骤。顺序出现不同基因的变化,包括癌基因、抑癌基因、细胞周期基因和DNA修复基因的改变。 STK15基因是一种与中心体异常紧密相关的基因。在许多研究中都发现,STK15基因在哺乳动物细胞中发生基因扩增、表达增高时,可以引起中心体数目、形态、大小和功能异常,形成多极纺锤体,导致染色体的分离异常而形成非整倍体。 近年来的研究发现STK15在多种恶性肿瘤中高表达,国内外文献主要涉及了食管癌、乳腺癌、卵巢癌、结肠癌、喉癌、胰腺癌、前列腺癌、肺癌、肝癌等的研究,国外资料有关STK15基因在膀胱癌中的研究极少,国内文献尚未有涉及膀胱癌。这一方面印证了该基因在多种肿瘤发生中的重要作用,同时提示我们应针对它在多大程度上影响了膀胱癌的发病风险开展广泛研究。 为了探索STK15基因在膀胱癌细胞系中及其在膀胱癌不同分级组织中的表达情况,了解STK15基因在膀胱癌发生与发展中的作用,探讨STK15基因Phe31Ile单核苷酸多态与膀胱癌风险是否有相关性?本文进行了以下实验研究:1.研究EJ、5637、T24三种膀胱肿瘤细胞株STK15基因的mRNA与蛋白水平的表达情况;2.研究膀胱癌不同分级组织中的STK15 mRNA与蛋白水平表达:分析STK15在膀胱癌发生与发展中的作用;3.研究STK15基因Phe 31lle 单核苷酸多态与膀胱癌风险的关系。 第一部分膀胱肿瘤细胞株中STK15的表达 目的:本部分探讨EJ、5637、T24 三种膀胱肿瘤细胞株及正常膀胱粘膜组织中STK15基因的mRNA与蛋白水平的表达情况。 方法: 应用RT-PCR和Westemblot方法分析EJ、5637、T24三种膀胱肿瘤细胞株STK15基因mRNA与蛋白的表达情况,探讨不同膀胱肿瘤细胞株中STK15基因mRNA与蛋白的表达的关系。 结果: 1.通过RT-PCR检测,EJ、5637、T24 膀胱肿瘤细胞株STK15mRNA是高表达,三种膀胱肿瘤细胞株的STK15/GAPDH比值分别为:1.5839、1.4096、1.3148。在正常膀胱组织中无表达。 2.通过Westemblot检测三种膀胱肿瘤细胞株STK15蛋白同样是高表达,三种膀胱肿瘤细胞株均出现STK15蛋白表达的阳性条带,其STK15/GAPDH比值分别为:5.13(EJ)、3.96(5637)、1.5(T24),在正常膀胱组织中无表达。 结论: 三种膀胱肿瘤细胞与正常膀胱组织比较STK15基因mRNA和蛋白均高表达;其表达高低依次为EJ细胞,5637细胞,T24细胞。 第二部分膀胱移行上皮癌组织中STK15的表达及其与膀胱癌的关系 目的:本部分探讨膀胱移行上皮癌组织及正常膀胱粘膜组织中STK15基因的表达情况,分析STK15的表达与临床病理参数之间的关系,初步揭示膀胱移行上皮癌发生、发展的分子机制。 方法: 应用免疫组织化学方法检测不同病理分期及组织分级的膀胱移行上皮癌标本和正常膀胱粘膜中STK15蛋白的表达情况,应用免疫组化自动分析系统进行分析,结果以积分光密度(integrated optical density,IOD)表示,探讨膀胱移行上皮癌组织中STK15蛋白的表达与临床病理参数之间的关系。 结果:在RT-PCR结果中,40例肿瘤组织中均有STK15 mRNA 表达,IOD值为2.1874±0.3875,10例正常粘膜中STK15mRNA呈阴性表达,两组间的差异具有统计学意义(P<0.01)。 免疫组织化学结果经过软件分析后显示,膀胱移行上皮癌组织中STK15表达的IOD值为6.6108±2.6762,正常膀胱粘膜组织STK15无表达,两组间差异有显著性意义(P<0.01),且STK15的表达与膀胱癌的分级分期密切相关(P<0.01)。 结论: STFK15 与膀胱癌的恶性程度密切相关,其不仅是膀胱癌的诊断与预后指标,而且为膀胱癌的基因靶向治疗提供理论依据。 第三部分STK15基因单核苷酸多态与膀胱癌易感性的研究 目的:本部分探讨STK15 Phe31Ile基因单核苷酸多态与膀胱癌易感性的研究。 方法: 以聚合酶链反应(PCR)和限制性片段长度多态性(RFLP)分析方法,检测了53例膀胱癌患者和30例正常对照者 STK15 Phe31Ile基因型,比较不同基因型与膀胱癌发生和发展的关系。 结果: STK15基因31密码子等位基因T、A在膀胱癌组和对照组分布的差异有显著性(X<'2>=9.332 P=0.00225),其中等位基因A使患膀胱癌危险性增加了1.83倍(1.02-4.65)。对照人群STK15 Phe/Phe、Phe/Ile和Ile/Ile基因型频率分别为56.67%,30%和13.33%.而膀胱癌病例组分别为22.64%.49.06%和128.30%,STK15基因31密码子(T-A)各基因型分布两组间差异有显著性(X<'2>=9.8722,P<0.01),纯合子突变Ile/Ile基因型、杂合子突变Phe/Ile基因型与野生Phe/Phe基因型相比,患膀胱癌的危险度分别提高了4.31倍和3.09倍。 结论:STKl5 Phe31Ile多态可能是膀胱癌的遗传易感因素。
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