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利用RNAi技术沉默玉米淀粉分支酶基因(sbeⅠ,sbe Ⅱb)表达的研究
中文名称: 利用RNAi技术沉默玉米淀粉分支酶基因(sbeⅠ,sbe Ⅱb)表达的研究
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论文编号: 3102028收藏本论文】【我的收藏】【我要投稿
英文名称: Silencing of Starch Branching Enzyme Genes(sbe Ⅰ and sbe Ⅱb) in Maize by RNA Interference (RNAi)
学位类型: 博士毕业论文
作者: 涉及隐私,隐去***  作者本人请参看权力声明>>
导师: 涉及隐私,隐去***
毕业学校: 涉及隐私,隐去***
专业: 遗传学
毕业年份: 涉及隐私,隐去***
关键字: 玉米 淀粉分支酶 RNAi 直链淀粉 木糖异构酶
简介目录: 点击此处 免费索取本论文简介和目录>>
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论文摘要: 直链淀粉是重要的工业原料,可用于生产生物降解薄膜、胶卷、高级包装材料、工业酒精以及作为(略)料.直链淀粉属于抗消化淀粉,食用后人体血糖水平不易升高,可用于制作糖尿病、肥胖、高血压、胆结石等病人的保健食品. 从普通玉(略)直链淀粉的成本很高,只有高直链玉米淀粉才具有商业开发价值.高直链玉米淀粉在美国和欧洲已经商品化,我国还没有高直链玉米淀粉品种规模化商业种植.我国工业所需要的直链淀粉主要从美国进口,进口原料价格比普通玉米淀粉高10倍. 本研究利用RNAi技术,将含有玉米淀粉分支酶基因sbeⅠ、s(略)序列的反向重复序列的表达载体通过基因枪转化玉米愈伤组织,沉默玉米淀粉分支酶基因sbeⅠ、sheⅡb(略)支链淀粉合成,提高直链淀粉含量.研究了RNAi沉默玉米淀粉分支酶基因的技术路线、方法及遗传效应,探讨了RNAi技术在作物遗传改良中的应用前景,为高直链淀粉玉米品种或杂交种的培育奠定基础,主要结果如下: 1.本研究利用网络数据库http://jura.wi.mit.edu/bioc/siRNAext/(略)淀粉分支酶基因sbeⅠ和sheⅡb的部分序列作...
Amylose is an important industry and functional food material. The cost of am(omitted) maize is expensive,and high amylose maize lines ha(omitted)ly been planted in China, So the study of high amylose maize lines i(omitted). In the study RNA interference(RNAi) method was used to silence starch branching enzyme genes in maize, sbeⅠand sbeⅡb, in or(omitted)uce synthesis of amylopectin and increase amylose content. Meanwhile, ap(omitted)prospect of RNAi in the crop was also discussed. As the...
目录:
摘要第4-6页
ABSTRACT第6-7页
第1章 文献综述第13-60页
  ·利用转基因技术进行玉米遗传改良的研究第13-30页
    ·转基因技术在植物遗传改良中的兴起与发展第13-15页
    ·玉米转基因实验技术研究概况第15-30页
      ·玉米遗传转化的几种主要方法第15-18页
      ·玉米转化受体的选择第18-21页
      ·标记基因的研究概况第21-28页
      ·遗传转化中组成型启动子的研究概况第28-30页
      ·外源基因在后代的遗传规律第30页
  ·玉米直链淀粉的应用及研究概况第30-47页
    ·玉米淀粉在食品等各领域的应用第30-32页
    ·玉米高直链淀粉改良的研究概况第32-37页
      ·玉米淀粉的分类及直链淀粉的定义、特性第33-34页
      ·直链淀粉在食品及其他领域的应用第34-36页
      ·高直链玉米研究现状第36-37页
    ·淀粉合成的生物学基础第37-47页
      ·淀粉的生物合成第37-41页
      ·淀粉合成过程中的关键酶第41-46页
      ·利用基因工程技术进行淀粉改良的研究概况第46-47页
  ·RNAI 技术的研究概况第47-56页
    ·RNAi 干涉的机制第48-50页
    ·主要实验技术第50-53页
    ·RNAi 技术的优越性第53-54页
    ·RNAi 技术在植物改良中的应用第54-56页
  ·转基因作物安全性研究概况第56-58页
    ·国内外转基因作物的发展现状第56-57页
    ·转基因食品潜在的安全性问题第57页
    ·转基因食品安全性评价第57-58页
  ·本研究的意义、目的和技术路线第58-60页
    ·本研究的目的、意义第58-59页
    ·本研究的技术路线第59-60页
第2章 基本实验材料及方法第60-68页
  ·基本材料及仪器第60页
    ·植物材料第60页
    ·菌株和质粒第60页
    ·试剂第60页
    ·主要仪器设备第60页
  ·常用溶液及BUFFER 的配制第60-61页
    ·常用培养基的配制第60-61页
    ·常用溶液的配制第61页
    ·常用Buffer 的配制第61页
  ·基本方法第61-68页
    ·大肠杆菌感受态细胞的制备第61页
    ·大肠杆菌感受态细胞的转化第61-62页
    ·质粒DNA 的提取第62-64页
      ·溶液配制第62页
      ·基本方法(碱裂解法)第62-63页
      ·质粒DNA 浓度及纯度检测第63-64页
    ·玉米总DNA 的提取第64-65页
      ·溶液的配制第64页
      ·基本方法(CTAB 改良法)第64-65页
      ·玉米总DNA 的纯度和浓度的检测第65页
      ·玉米总DNA 的保存第65页
    ·玉米籽粒总RNA 的提取第65-68页
      ·试剂与溶液第65-66页
      ·基本方法(酚-SDS 和LiCl 沉淀结合改良法)第66页
      ·玉米RNA 的样品纯度和浓度的检测第66-68页
第3章 SBEⅠ、SBEⅡB RNAI 表达载体的构建第68-106页
  ·材料与方法第68-75页
    ·材料第68页
    ·方法第68-75页
      ·PCR 扩增引物第68-70页
      ·sbeⅠ、sbeⅡb 基因的RT-PCR 扩增第70-72页
      ·XylA 基因的PCR 扩增第72页
      ·sbeⅡb 启动子的PCR 扩增第72-73页
      ·sbeⅠ启动子的PCR 扩增第73-74页
      ·PCR 扩增产物的回收与连接反应第74页
      ·连接产物的转化第74-75页
      ·重组质粒的扩繁第75页
      ·表达载体的构建第75页
  ·结果与分析第75-105页
    ·目的基因的克隆与序列分析第75-86页
      ·sbeⅠ基因的克隆与序列分析第75-77页
      ·sbeⅡb 基因的克隆与序列分析第77-79页
      ·xylA 基因的克隆与序列分析第79-81页
      ·sbeⅡb 基因启动子的克隆与序列分析第81-84页
      ·sbeⅠ基因启动子的克隆与序列分析第84-86页
    ·玉米SBEⅠ、SBEⅡb RNAi 表达载体的构建第86-105页
      ·SBEⅠ RNAi 表达载体的构建第86-97页
      ·SBEⅡb RNAi 表达载体的构建第97-101页
      ·淀粉分支酶基因RNAi 表达载体的构建流程第101-104页
      ·四种淀粉分支酶基因RNAi 表达载体第104-105页
  ·讨论第105-106页
第4章 不同基因型玉米幼胚愈伤组织培养特性的研究第106-112页
  ·材料和方法第106-107页
    ·材料第106-107页
    ·培养基第107页
    ·愈伤组织的培养第107页
    ·幼胚培养及植物再生与移栽第107页
  ·结果与分析第107-111页
    ·基因型对玉米幼胚愈伤组织诱导的影响第107-109页
    ·培养基对玉米幼胚愈伤组织诱导的影响第109-110页
    ·不同杂种优势类群自交系玉米幼胚培养特性的比较第110-111页
  ·讨论第111-112页
第5章 玉米基因枪转化及筛选体系的建立第112-122页
  ·材料和方法第112-116页
    ·材料第112-113页
    ·各类筛选培养基的配制第113页
    ·转化载体的制备及纯化第113-114页
    ·金粉制备第114-115页
    ·微粒子弹的准备第115页
    ·基因枪的轰击第115页
    ·转化愈伤组织的筛选和植株的再生第115-116页
  ·结果与分析第116-120页
    ·转化pBAC411 和pBAC417 的愈伤组织的筛选第116页
    ·转化pBAC413 的愈伤组织的筛选第116-117页
    ·pBAC418,pBAC411 与pBAC418 和pBAC413 与pBAC417 共转化后愈伤组织的筛选第117-118页
    ·转基因玉米植株的分化、移栽第118-120页
  ·讨论第120-122页
第6章 转基因玉米植株的分子生物学检测第122-134页
  ·材料与方法第122-128页
    ·材料与仪器设备第122-123页
    ·实验方法第123-128页
      ·转基因后代植株基因组DNA 的提取第123-124页
      ·转基因后代植株的点杂交检测第124-127页
      ·转基因植株的PCR 鉴定第127-128页
      ·转基因玉米FAD2 intron 和xylA 基因的PCR-Southern 验证第128页
  ·结果与分析第128-132页
    ·转基因玉米叶片DNA 的提取第128-129页
    ·两类探针活性的检测第129页
    ·转基因玉米后代植株xylA 基因的检测结果第129-131页
      ·玉米转化植株的xylA 基因的DNA 点杂交和PCR 检测第129-130页
      ·转基因玉米的xylA 基因PCR-Southern 杂交检测第130-131页
    ·转基因玉米后代植株FAD2 intron 基因的检测结果第131-132页
      ·玉米转化植株的FAD2 intron 基因的DNA 点杂交和PCR 检测第131-132页
      ·转基因玉米FAD2 intron 基因的PCR-Southern 杂交检测第132页
  ·讨论第132-134页
第7章 转基因玉米籽粒的淀粉含量检测第134-139页
  ·材料和方法第134-136页
    ·材料与仪器设备第134-135页
    ·实验方法第135-136页
      ·玉米籽粒的蛋白、油脂和总淀粉含量的测定第135页
      ·玉米籽粒的直链淀粉含量的测定第135-136页
  ·结果与分析第136-138页
    ·再生玉米株系籽粒的蛋白、油脂和总淀粉含量的测定第136页
    ·玉米籽粒直链淀粉含量的测定第136-138页
  ·讨论第138-139页
第8章 结论及创新点第139-141页
  ·结论第139-140页
  ·创新点第140-141页
第9章 下一步研究计划第141-142页
参考文献第142-162页
缩略语第162-164页
致谢第164-165页
作者简介第165页
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