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提高绵羊体细胞核移植效率的研究
中文名称: 提高绵羊体细胞核移植效率的研究
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论文编号: 3102017收藏本论文】【我的收藏】【我要投稿
英文名称: Study on Improving Efficiency of Nuclear Transplantation in Sheep
学位类型: 博士毕业论文
作者: 涉及隐私,隐去***  作者本人请参看权力声明>>
导师: 涉及隐私,隐去***
毕业学校: 涉及隐私,隐去***
专业: 临床兽医学
毕业年份: 涉及隐私,隐去***
关键字: 绵羊 山羊 卵母细胞 皮肤成纤维细胞 孤雌激活 冷冻保存 核移植 精子提取物
简介目录: 点击此处 免费索取本论文简介和目录>>
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论文摘要: 本研究对绵羊卵母细胞体外成熟、卵母细胞冷(略)细胞孤雌激活、绵羊同种和异种体细胞核移植及重构胚胎体外培养等关键技术进行了试验分析,以期提高绵羊体细胞核移植的效率,建立完善的核移植技术体系,为进一(略)克隆绵羊和异种克隆个体提供技术支撑.本研究内容包括以下几个方面:⒈在绵羊卵母细胞成熟培养液中添加孕酮等某些影响体外成熟的成份,确定绵羊卵母细胞的最佳成熟方案.⒉并通过对比不同冷冻保护剂对卵母细胞的冷冻保存效果,为核移植操作批量提供成熟的卵母细胞.⒊采用胞质注射法,建立精子提取物激活卵母(略)并且与离子霉素结合6-DMAP激活法和电激活法进行了比较,筛选出适宜激活方法.⒋体外分离培养得到道赛特绵羊和莎能(略)肤成纤维样细胞,对绵羊皮肤成纤维细胞的生物学特性和不同细胞因子对其生长增殖的影响进行了研究,并对绵羊成纤维细胞和山羊成纤维细胞分别进行体外传代及冻存,为绵羊体细胞核移植和绵羊-山羊种间核移植试验提供了供体细胞.⒌绵羊孤雌激活胚、绵羊重构胚和绵羊-山羊种(略)置于不同的培养系统中培养,优化绵羊胚胎体外体系,增加胚胎的体外发育潜力.主要研究结果如下: ...
In this paper,t(omitted)ion, cryopres(omitted)nd activation of sheep oocytes in vitro were indicated and analysised the effect of (omitted)ansfer (NT) and embryo culture methods on the developmental efficiency of homogeneous and heterogeneous reconstructed embryos. The studies in(omitted)eral following researches: ⒈ different(omitted) such as progesterone added in oocyte maturation culture medium were studied the effect of those additives on the maturation rate of sheep oocytes. ⒉ different c...
目录:
摘要第6-9页
ABSTRACT第9-11页
第1章 哺乳类动物卵母细胞的体外利用开发第16-26页
  ·卵泡卵母细胞体外成熟第16-21页
    ·卵母细胞成熟概论第16-17页
    ·卵母细胞成熟的特征第17-18页
    ·卵母细胞成熟的判断第18-19页
    ·卵母细胞的获取与分级第19页
    ·影响卵母细胞体外成熟的因素第19-21页
  ·卵母细胞冷冻保存的研究进展第21-26页
    ·卵母细胞冷冻保存原理第21页
    ·冷冻保护剂的种类第21-23页
    ·卵母细胞的冷冻方法第23-24页
    ·影响卵母细胞冷冻的因素第24-26页
第2章 哺乳类动物核移植的研究进展第26-52页
  ·哺乳类动物胚胎细胞及干细胞核移植研究进展第27-29页
  ·哺乳类动物同种体细胞核移植研究进展第29-31页
    ·国外哺乳类动物同种体细胞核移植研究概况第29-30页
    ·国内哺乳类动物同种体细胞核移植研究概况第30-31页
  ·异种动物细胞核移植研究进展第31-36页
    ·国外异种动物细胞核移植研究历史概况第32-33页
    ·国内异种动物细胞核移植研究历史概况第33-34页
    ·异种动物细胞核移植相关问题的研究概况第34-35页
    ·提高动物细胞异种核移植尚待解决的问题第35-36页
  ·哺乳动物核移植相关机制的研究进展第36-44页
    ·MPF 与核移植的关系第36-38页
    ·卵母细胞激活第38-42页
    ·核的重编程第42-43页
    ·端粒及端粒酶问题第43-44页
    ·基因印迹问题第44页
  ·影响哺乳动物核移植的因素第44-49页
    ·核受体胞质的准备及其对核移植的影响第44-45页
    ·核供体的准备及其对核移植的影响第45-47页
    ·卵母细胞去核方法对核移植的影响第47-48页
    ·融合-激活方案对核移植的影响第48-49页
  ·体细胞核移植技术的应用前景和存在问题第49-52页
    ·体细胞核移植技术的应用前景第49-50页
    ·体细胞核移植存在的问题第50-52页
前言第52-54页
第3章 绵羊卵母细胞的体外成熟培养第54-62页
  ·材料和方法第55-57页
    ·试验材料及仪器第55页
    ·试验方法第55-57页
  ·结果与分析第57-59页
    ·不同类型血清和促性腺激素对绵羊卵母细胞体外成熟的影响第57-58页
    ·添加不同浓度BFF 对绵羊母细胞体外成熟的影响第58页
    ·不同浓度的孕酮添加对绵羊卵母细胞体外成熟的影响第58-59页
  ·讨论第59-61页
    ·不同类型血清对绵羊卵母细胞体外成熟的影响第59页
    ·不同来源促性腺激素对绵羊卵母细胞体外成熟的影响第59-60页
    ·添加不同浓度BFF 对绵羊母细胞体外成熟的影响第60页
    ·不同浓度的孕酮对绵羊卵母细胞体外成熟的影响第60-61页
  ·小结第61-62页
第4章 绵羊卵母细胞的冷冻保存试验研究第62-74页
  ·材料和方法第63-66页
    ·试验材料及仪器设备第63页
    ·冷冻液的配制及试验设计第63-64页
    ·绵羊卵母细胞的采集第64页
    ·卵母细胞的体外成熟第64页
    ·卵母细胞的程序化冷冻第64-65页
    ·卵母细胞的玻璃化冷冻第65页
    ·卵母细胞的孤雌激活第65页
    ·卵母细胞冷冻效果的评定与数据的统计分析第65-66页
  ·结果第66-69页
    ·在程序冷冻中不同冷冻液对绵羊卵母细胞冷冻效果的影响第66-67页
    ·不同植冰温度对绵羊卵母细胞程序化冷冻的效果第67-68页
    ·不同玻璃化冷冻液对绵羊卵母细胞的冷冻效果分析第68页
    ·不同发育时期卵母细胞玻璃化冷冻解冻后的发育能力第68页
    ·不同浓度海藻糖对卵母细胞的冷冻效果的影响第68-69页
  ·讨论第69-72页
    ·卵母细胞冷冻效果的评判标准第69-70页
    ·不同冷冻方法对卵母细胞冷冻效果的影响第70页
    ·不同发育时期对卵母细胞冷冻效果的影响第70-71页
    ·非渗透性保护剂与渗透性保护剂配合使用对卵母细胞冷冻效果的影响第71-72页
  ·小结第72-74页
第5章 不同激活方法对卵母细胞的孤雌激活效果第74-82页
  ·材料与方法第74-76页
    ·材料第74页
    ·方法第74-75页
    ·数据统计方法第75-76页
  ·结果第76-79页
    ·不同参数的电激活对卵母细胞孤雌激活的效果第76-77页
    ·绵羊精子提取物对卵母细胞的激活效果第77-78页
    ·不同激活方法对绵羊卵母细胞的激活效果的比较第78-79页
  ·讨论第79-81页
    ·不同参数的电激活对卵母细胞孤雌激活的影响第79-80页
    ·精子提取物对卵母细胞孤雌激活的影响第80-81页
    ·离子霉素的对卵母细胞孤雌激活的影响第81页
  ·小结第81-82页
第6章 绵羊体细胞核移植的研究第82-97页
  ·材料与方法第82-85页
    ·材料第82-83页
    ·绵羊皮肤成纤维细胞的体外分离培养第83-84页
    ·绵羊同种体细胞核移植第84-85页
    ·统计方法第85页
  ·结果第85-93页
    ·培养液对原代成纤维细胞培养结果的影响第85-86页
    ·消化传代对细胞纯化及生长的影响第86-87页
    ·培养液对传代细胞培养结果的影响第87-88页
    ·EGF 和胰岛素对细胞生长的影响第88-89页
    ·冻存对皮肤成纤维细胞形态及生物学特性的影响第89页
    ·去核时间与去核率对体细胞核移植结果的影响第89-90页
    ·不同核移植重构胚构建方法对体细胞核移植结果的影响第90页
    ·不同供体细胞的处理方法对体细胞核移植结果的影响第90-91页
    ·不同激活方法对体细胞核移植效果的影响第91-92页
    ·成纤维细胞注核后不同间隔时间激活对移植胚发育的影响第92-93页
  ·讨论第93-96页
    ·绵羊皮肤成纤维细胞的生长特性第93-94页
    ·核移植重构胚的构建方法对体细胞核移植效率的影响第94-95页
    ·不同激活方法对体细胞核移植胚胎发育的影响第95页
    ·注核后激活间隔时间对核移植胚胎体外发育的影响第95-96页
  ·小结第96-97页
第7章 山羊-绵羊异种体细胞核移植的研究第97-106页
  ·材料和方法第97-99页
    ·材料第97-98页
    ·山羊皮肤成纤维细胞的体外分离培养及颗粒细胞的准备第98页
    ·山羊-绵羊种间体细胞核移植第98-99页
  ·结果第99-103页
    ·组织块的保存和细胞培养第99页
    ·莎能山羊皮肤细胞冻存第99-100页
    ·不同激活方法对山羊-绵羊异种核移植胚胎发育的影响第100-101页
    ·不同核移植胚构建方法对山羊-绵羊异种体细胞核移植的影响第101-102页
    ·供体细胞不同处理方法对核移植结果的影响第102-103页
    ·受体细胞冷冻对异种体细胞核移植结果的影响第103页
  ·讨论第103-105页
    ·培养液对皮肤成纤维细胞生长的影响第103页
    ·成纤维细胞的不同处理方法对异种体细胞核移植结果的影响第103-104页
    ·不同类型供体细胞对异种体细胞核移植胚效率的影响第104-105页
  ·小结第105-106页
第8章 提高体细胞核移植胚体外发育能力的研究第106-114页
  ·材料和方法第106-108页
    ·试验材料及仪器设备第106-107页
    ·培养液第107页
    ·绵羊卵母细胞的采集与体外成熟第107页
    ·共培养单层细胞的制备第107-108页
    ·体细胞核移植胚胎的获得第108页
    ·核移植胚激活第108页
    ·胚胎的体外培养第108页
    ·试验设计及统计分析第108页
  ·结果第108-111页
    ·不同培养液组合对重构胚发育的影响第108-109页
    ·添加孕酮对胚胎发育的影响第109-110页
    ·不同共培养体细胞对绵羊核移植胚胎早期发育的影响第110-111页
    ·不同蛋白质添加物对颗粒细胞与核移植胚共培养的影响第111页
  ·讨论第111-113页
    ·不同培养液组合对重构胚发育的影响第111页
    ·孕酮对重构胚发育的影响第111-112页
    ·共培养体系对重构胚发育的影响第112页
    ·蛋白添加物对胚胎发育的影响第112-113页
  ·小结第113-114页
论文总结论第114-116页
论文创新点第116-117页
参考文献第117-133页
缩略词第133-136页
致谢第136-137页
作者简介第137页
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