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牛卵母细胞去核方法及体细胞核移植的研究
中文名称: 牛卵母细胞去核方法及体细胞核移植的研究
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论文编号: 3102016收藏本论文】【我的收藏】【我要投稿
英文名称: Enucleation and Adult Somatio Cell Nuclear Transfer in Bovine
学位类型: 博士毕业论文
作者: 涉及隐私,隐去***  作者本人请参看权力声明>>
导师: 涉及隐私,隐去***
毕业学校: 涉及隐私,隐去***
专业: 临床兽医学
毕业年份: 涉及隐私,隐去***
关键字: 显示去核 β-微管蛋白 核移植 微卫星DNA
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论文摘要: 实验一:卵母细胞的成熟在(略)中有很重要的作用.本实验比较了:⑴不同直径大小的牛卵泡液对牛卵母细胞体外成熟的影响.添加10% FBS成熟液作为对照组,实验组为直径>8 mm 10%牛卵泡液(BFF)、2~8 mm 10% BFF及5% >8 mm BFF+2~8 mm 5% BFF,成熟1(略)细胞的颗粒细胞,比较卵母细胞成熟率及激活处理后的囊胚发育率.结果表明:对照组与实验组之间成熟率无显著的差异(P>0.05),>8 mm 10% BFF囊胚率(43.40%)显著的高于对照组,添加卵泡液的混合(略)著高于对照组,说明卵泡液的添加能有效提高牛卵母细胞孤雌囊胚发育率.⑵卵泡液对重组胚发育的影响.实验⑴研究发现,大卵泡中粘多糖的存在不利于卵母细胞进行重组胚的操作,因此减少了>8mm的BFF;以10% FBS为对照组,实验组为5% BFF(2~(略) 5% FBS、5% (>(略).5% +2~8 mm 2.5%,混合)+ 5%FBS及10% BFF(2~8 mm),成熟18h后选择成熟卵母细胞去核构建重组胚.5%(>8 mm 2.5% + 2~8 mm 2.5%,混合)+...
Experment 1.It is important the nuclear transfer pro(omitted)oocyte mature.This experiment was desgined:⑴w e added different diameter size bovine liquor folliculi(BFF)t(omitted)luid in vitro.10% FBS mature fluid was for control group.Our test(omitted) the diameter > 8 mm 10% cow liquor folliculi (BFF), 2~8 mm 10%(omitted)% > 8 mm BFF + 2~8 mm 5% BFF.After mature 18h removes the ovocyte the granular cell and compared t mature rate and activated oocytes the rate o(omitted)st rate.The result indicat...
目录:
摘要第5-7页
ABSTRACT第7-9页
第1章 体细胞核移植的研究进展第13-39页
  ·哺乳动物胚胎细胞核移植的研究进展第13-14页
  ·体细胞核移植的研究进展第14-15页
  ·核移植的程序第15-20页
    ·供体细胞的选择第15-16页
    ·受体细胞的获取和去核第16-17页
    ·细胞核的移植第17-18页
    ·重组胚的激活第18-20页
    ·重组胚的培养和移植第20页
  ·哺乳动物核移植相关机理的研究第20-29页
    ·甲基化和印迹第21-22页
    ·组蛋白乙酰化第22-23页
    ·X 染色体失活第23-24页
    ·端粒第24-25页
    ·MPF 在核质互换中的作用第25-27页
    ·RNA 转录模式与供体核的再程序化第27-29页
  ·影响核移植效率的因素第29-34页
    ·细胞周期同步化对核移植胚的影响第29-30页
    ·卵母细胞成熟质量对核移植的影响第30-33页
    ·去核操作对核移植胚胎的影响第33页
    ·细胞松弛素处理对核移植的影响第33页
    ·激活核移植胚影响第33-34页
    ·核移植胚的体外培养对发育的影响第34页
  ·存在的问题第34-35页
  ·体细胞核移植意义及应用前景第35-38页
    ·治疗性克隆第35-36页
    ·拯救濒危动物第36页
    ·应用于转基因技术第36页
    ·异种器官移植第36-37页
    ·与胚胎干细胞(ES cell)技术相结合的治疗第37-38页
  ·结束语第38-39页
第2章 微卫星DNA 标记与亲子鉴定文献综述部分第39-42页
  ·微卫星 DNA 标记技术第39-40页
    ·微卫星DNA 的结构及其多态性原理第39-40页
    ·微卫星标记标记的特点第40页
  ·微卫星DNA 标记在亲子鉴定中的应用第40-42页
第3章 牛卵泡液对卵母细胞体外成熟及重组胚发育的影响第42-48页
  ·材料和方法第42-44页
    ·材料第42页
    ·卵母细胞体外成熟第42-43页
    ·牛卵泡液的收集第43页
    ·牛卵母细胞的孤雌激活第43页
    ·重构胚的构建第43页
    ·重组胚激活和培养第43-44页
    ·实验设计第44页
    ·数据分析第44页
  ·结果第44-46页
    ·不同直径的卵泡液对卵母细胞成熟及孤雌胚发育的影响第44页
    ·卵泡液浓度对重组胚发育的影响第44-45页
    ·对重组胚囊胚细胞计数第45-46页
  ·讨论第46-47页
  ·小结第47-48页
第4章 牛卵母细胞成熟过程中微管蛋白结构变化初探第48-52页
  ·材料和方法第48-49页
    ·试剂材料第48页
    ·卵母细胞体外成熟第48页
    ·实验分组及免疫组织化学染色第48-49页
  ·结果第49-50页
  ·讨论第50-51页
  ·小结第51-52页
第5章 卵母细胞去核方法的研究第52-58页
  ·材料和方法第52-53页
    ·材料第52页
    ·卵母细胞体外成熟第52页
    ·实验设计第52-53页
    ·数据分析第53页
  ·结果第53-55页
    ·蔗糖显示去核第53页
    ·诱导去核第53-54页
    ·DM 显示去核第54-55页
  ·讨论第55-57页
  ·小结第57-58页
第6章 激活方法对牛核移植胚发育的影响第58-62页
  ·材料和方法第58-59页
    ·卵母细胞的体外成熟第58页
    ·核移植的程序第58页
    ·重组胚的体外培养第58页
    ·实验设计及分组第58-59页
    ·数据分析第59页
  ·结果第59页
  ·讨论第59-61页
  ·小结第61-62页
第7章 供体细胞对重组胚发育的影响第62-67页
  ·材料和方法第62-63页
    ·供体细胞的培养第62页
    ·卵母细胞体外成熟第62-63页
    ·重组胚构建第63页
    ·重组胚的培养第63页
    ·试验设计第63页
    ·数据分析第63页
  ·结果第63-65页
    ·血清饥饿供体细胞对重组胚发育的影响第63-64页
    ·供体细胞传代次数在核移植中的比较第64页
    ·细胞的冷冻保存对重新程序化的影响第64-65页
  ·讨论第65-66页
    ·血清饥饿用于细胞周期同步化在对重组胚发育的影响第65-66页
    ·供体细胞传代次数在核移植中的比较第66页
    ·细胞的冷冻保存对重新程序化的影响第66页
  ·小结第66-67页
第8章 应用微卫星DNA 鉴定体细胞克隆胚胎第67-73页
  ·材料和方法第67-70页
    ·牛基因组DNA 的提取第67页
    ·微卫星引物的设计与合成第67-68页
    ·微卫星DNA 的PCR 反应体系与条件第68-69页
    ·PCR 反应产物的聚丙烯酰胺凝胶(PAGE)电泳第69-70页
    ·图象分析第70页
  ·结果第70-72页
    ·微卫星引物的PCR 扩增结果第70页
    ·PCR 产物的聚丙烯酰胺(PAGE)检测第70-72页
  ·讨论第72页
  ·小结第72-73页
结论第73-74页
参考文献第74-89页
致谢第89-90页
实验胚胎图第90-93页
附录第93-95页
个人简介第95-96页
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