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人膝骨关节炎患者关节液中纳米细菌检测及其对软骨细胞生物学形状的影响和机制探讨
中文名称: 人膝骨关节炎患者关节液中纳米细菌检测及其对软骨细胞生物学形状的影响和机制探讨
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论文编号: 3101896收藏本论文】【我的收藏】【我要投稿
英文名称: The Investigation of Nanobacteria in Human Arthritic Synovial Fluids of Osteoarthritis and Its Morphological Effects and Mechanisms of Action on Human Arthritic Chondrocyte Cell
学位类型: 博士毕业论文
作者: 涉及隐私,隐去***  作者本人请参看权力声明>>
导师: 涉及隐私,隐去***
毕业学校: 涉及隐私,隐去***
专业: 外科学
毕业年份: 涉及隐私,隐去***
关键字: 骨关节炎 关节液 纳米细菌 免疫荧光试验 电镜 损伤 坏死 MTT 流式细胞仪 自由基 SOD MDA LDH
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论文简介:第一部分人膝骨关节炎患者关节液中纳米细菌检测 目的:培养检测人膝骨关节炎患者关节液中有无纳米细菌存在。 方法:分别抽取25例膝骨关节炎患者关节液和正常膝关节22例的关节液进行纳米细菌的培养;每14天用全自动生化仪动态检测培养液中电解质和葡萄糖的变化情况;培养8周后使用纳米细菌单克隆抗体免疫荧光试验进行纳米细菌鉴定和利用电镜进一步观察其形状。 结果:骨关节炎组的关节液培养过程中,上清液中的K、Na、Cl、Mg及葡萄糖的浓度无明显变化,而Ca、P进行性减少,每14天检测结果比较差异有显著性;正常膝关节组的关节液培养中K、Na、Cl、Ca、Mg、P及葡萄糖的浓度42天内无明显的变化。免疫荧光方法检测:骨关节炎组25例患者的关节液中全部可检测到发出绿色荧光的纳米细菌,阳性率100%;正常膝关节组22例中有1例检测出纳米细菌,阳性率4.5%;二组纳米细菌阳性率比较具有显著性差异。透视电镜下测量出纳米细菌大小为100-400nm。 结论:骨关节炎患者关节液中培养可检测出纳米细菌,阳性率100%;正常膝关节的关节液中检测到的纳米细菌阳性率4.5%;纳米细菌可能与骨关节炎的发病有关,但尚须进一步加以证实。 第二部分纳米细菌对人关节软骨细胞生物学形态的影响 目的:观察纳米细菌是否对人关节软骨细胞有损伤作用。 方法:光镜下观察不同浓度的纳米细菌攻击人关节软骨细胞后的形态学变化;四唑盐(MTT)比色试验检测软骨细胞被纳米细菌攻击后的存活和生长情况;免疫荧光染色法观察不同攻击时间的纳米细菌与软骨细胞的空间位置关系;流式细胞仪检测被纳米细菌攻击后软骨细胞凋亡情况。 结果:光镜下不同浓度的纳米细菌攻击软骨细胞后形态学有不同的变化:极低浓度时无明显影响,但随浓度的增加和时间的延长,逐渐出现细胞变形、轮廓不清、细胞膜损伤破裂、坏死及脱落,严重时软骨细胞被完全破坏;比较不同浓度的纳米细菌攻击软骨细胞后同一时间点的MTT的值发现:高浓度的纳米细菌攻击后,活细胞的存活和生长较低浓度的纳米细菌攻击时受到明显抑制;免疫荧光结果显示:纳米细菌可以在较短时间内侵入到软骨细胞中,随时间的延长纳米细菌可以不断进入到细胞内;流式细胞仪检测发现:24小时内不同浓度的纳米细菌攻击软骨细胞后细胞凋亡率无明显差异。 结论:纳米细菌可以损伤软骨细胞;短时间内(24小时)被攻击的软骨细胞没有发现明显凋亡;高浓度的纳米细菌会造成软骨细胞更严重的损伤。 第三部分纳米细菌损伤人关节软骨细胞的机制初步探讨 目的:从自由基的角度初步探讨纳米细菌对人关节软骨细胞的损伤机制。 方法:浓度为0.5Mcfarland的纳米细菌攻击人关节软骨细胞后,分别在0、6、12、24、48、72小时取培养液,按照试剂盒说明检测其超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)和乳酸脱氢酶(LDH)的变化。 结果:上清液中SOD的活性逐渐升高;MDA含量无明显变化;NO含量升高,48小时NO含量达到最高,72小时下降,各组NO与0小时比较含量均升高,差异具有显著性:随着攻击时间的延长LDH活性逐渐升高。 结论:纳米细菌攻击人关节软骨细胞时,可能没有氧自由基的参与;软骨细胞在受到纳米细菌攻击时,有NO参与,并随着时间延长N0浓度增高后下降;人关节软骨细胞在受到纳米细菌攻击时,NO介导的细胞损伤可能是软骨细胞坏死机制之一。
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