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食管鳞癌中热休克蛋白70的表达及意义
中文名称: 食管鳞癌中热休克蛋白70的表达及意义
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论文编号: 3101889收藏本论文】【我的收藏】【我要投稿
英文名称: Studies on Expression and Significance of HSP70 in Esophageal Squamous Cell Carcinoma
学位类型: 博士毕业论文
作者: 涉及隐私,隐去***  作者本人请参看权力声明>>
导师: 涉及隐私,隐去***
毕业学校: 涉及隐私,隐去***
专业: 外科
毕业年份: 涉及隐私,隐去***
关键字: 食管鳞癌 热休克蛋白70 免疫组织化学 RT-PCR 反义寡核苷酸 细胞周期 浸润能力
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论文简介:食管癌是广泛分布于世界各地的全球性疾病,其发病率有明显的地区性差异,中国是世界的食管癌高发区;尽管食管癌的诊疗水平有了明显的提高,但它的远期生存率的改善仍非常缓慢,彻底治愈的希望依然寄托在患者被确诊为癌症时疾病所处的临床分期。尽管肿瘤浸润深度、肿瘤病理分级和淋巴结转移是食管癌预后的主要影响因素,但在临床实践中可观察到,在部分食管癌手术后长期生存的患者中也有侵透食管纤维膜甚至侵及周围软组织、低分化癌和淋巴结转移的患者,相反,在部分生存期短的患者中也有肿瘤不大、高分化癌和无淋巴结转移的患者,因此要想对食管癌预后做出更准确的判断,仍需寄希望于基因水平的进一步研究。 热休克蛋白(heat shock protein,HSP)是一个广泛存在却又高度保守的多肽类蛋白质家族,按其分子量大小可分为HSP27,HSP60,HSP70,HSP90等。其主要功能是作为分子伴侣维护细胞生命活动必需的蛋白质的稳定,具有“看家”和细胞保护功能以及重要的调节作用。近年来,HSP与临床疾病特别是与肿瘤的关系日益受到重视,HSP与肿瘤细胞凋亡、肿瘤免疫和肿瘤患者预后的关系已成为肿瘤学、免疫学研究的热点领域。其中HSP70与肿瘤预后的关系较为密切,目前研究表明HSP70在胃癌、乳腺癌和前列腺癌等患者体内高表达与肿瘤浸润、淋巴结转移有关,是预后不良的标志。但有关HSP70在食管癌组织中表达和预后意义的研究很少,而且其研究结果不一致,HSP70影响食管癌预后的机制尚不清楚。在食管癌中,鳞癌是最主要组织学类型,约占95%左右。因此,我们就HSP70与食管鳞癌的关系进行了一系列研究。 第一部分,目的:探讨HSP70与食管鳞癌预后的关系。 方法:收集临床病理资料基本匹配的100例临床资料和石蜡包埋肿瘤组织,用免疫组化方法研究其HSP70的表达情况。 结果:100例食管鳞癌组织中,90例HSP70蛋白呈阳性表达,阳性率为90%,而在15例正常粘膜中,只有2例HSP70蛋白呈弱阳性表达,阳性率为13.3%,而且仅局限于上皮基底层细胞,二者之间HSP70的表达水平差异具有统计学意义(P<0.01),食管鳞癌组织中HSP70蛋白的表达水平比正常食管粘膜明显升高,提示HSP70可能参与了食管鳞癌的发生。在50例不伴有淋巴结转移的食管鳞癌病例中,有48例(96%)表达HSP70,而在50例伴有淋巴结转移的病人中,HSP70的表达阳性例数为42例(84%),差异具有统计学意义(P<0.05),提示HSP70的表达与淋巴结转移有关。在48例术后生存期<3年的食管鳞癌病例中,有40例(83.3%)表达HSP70,而在52例生存期>5年的病人中,HSP70的表达阳性例数为50例(96.1%),阳性率差异有统计学意义(P<0.05)。HSP70蛋白的表达与预后有关,HSP70高表达者预后好。 结论:HSP70可以作为判断食管鳞状细胞癌预后的重要生物指标之一。 第二部分,目的:探讨食管鳞癌及正常食管黏膜组织中热休克蛋白70(HSP70)的表达状况及其意义。 方法:收集食管鳞癌组织33例,手术切除后立即于无菌状态下切取约0.5cm X 0.5cm X 0.8cm大小食管鳞癌组织及远切端正常食管粘膜组织,液氮速冻。提取新鲜组织中的蛋白质并定量后,行SDS变性聚丙烯酞胺凝胶电泳,westernblotting检测HSP70基因蛋白的表达;提取新鲜组织中的总RNA,采用半定量RT-PCR方法检测HSP70基因Mrna的表达,以管家基因β-actin作为内对照。应用Image Tool 3.0图象分析软件对检测结果进行定量分析。分析HSP70基因蛋白表达与食管鳞癌临床病理学参数的关系。 结果:在食管鳞癌中HSP70 Mrna和蛋白阳性表达率分别为100%和93.9%,与食管正常粘膜相比明显升高(分别为69.7%和45.5%);食管鳞癌组织和正常食管粘膜中的HSP70 Mrna的相对表达量分别为1.35±0.21和0.73±0.19,差异具有统计学意义(P<0.01):HSP70基因蛋白表达与食管鳞癌淋巴结转移相关,与年龄、性别和浸润深度无关。 结论:食管鳞癌组织中HSP70基因表达水平明显升高,且于淋巴结转移相关,HSP70基因可能参与了食管鳞癌的发生、发展过程。 第三部分,目的:观察热休克蛋白70(HSP70)反义寡核苷酸阻断食管鳞癌细胞Eca-109 HSP70 的表达及其对食管鳞癌细胞增殖、凋亡和浸润能力的影响。 方法:分别应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和 Western blotting 技术检测HSP70反义寡核苷酸(10 u mol/L)转染食管鳞癌细胞Eca-109后,HSP70基因Mrna和蛋白表达的变化;通过绘制细胞生长曲线观察HSP70反义寡核苷酸转染对肿瘤细胞的生长抑制效应;利用流式细胞术分析转染后细胞凋亡率和细胞周期分布的改变;应用Transwell小室观察转染后细胞浸润能力的变化。 结果:HSP70 反义寡核苷酸阻断了Eca-109细胞HSP70 Mrna和蛋白的表达;Eca-109 细胞增殖受到明显抑制,在转染后48h和72h,生长抑制率分别为25.5%和35.4%;G1期细胞百分数增加,S期细胞百分数减少,细胞阻滞于G1期;反义寡核苷酸组细胞的凋亡发生率高于正义寡核苷酸组和未转染组,差异具有统计学意义(P<0.05);与其他两组相比,反义寡核苷酸组细胞的浸润能力未发生明显变化(P>0.05)。 结论:HSP70 反义寡核苷酸能抑制食管鳞癌细胞Eca-109的生长并诱导其发生凋亡,但对细胞的浸润能力无影响。
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