免费论文
收费论文
发表论文
我要投稿
设为首页 招标网
联系我们
经济学|管理学|法学|计算机|医学|教育|文学|政治|艺术|哲学|更多 经济学|管理学|法律|计算机|医学|教育|文学|政治|艺术|哲学|更多
 论文搜索
  推荐服务: 论文发表 收费论文
期刊论文格式
毕业论文格式
期刊论文范文
毕业论文范文
论文致谢
毕业论文答辩
开题报告
论文选题
英文摘要书写
RNAi抑制肺腺癌细胞EGFR表达对信号传导通路及耐药基因影响的研究
中文名称: RNAi抑制肺腺癌细胞EGFR表达对信号传导通路及耐药基因影响的研究
全文提供: 购买充值卡,就可下载本篇论文全文  
论文编号: 3101879收藏本论文】【我的收藏】【我要投稿
英文名称: Effects of EGFR Downregulation via RNAi on Downstream Signal Transduction Pathways and Multi-drug Resistance Genes in Human Lung Adenocarcinoma Cell
学位类型: 博士毕业论文
作者: 涉及隐私,隐去***  作者本人请参看权力声明>>
导师: 涉及隐私,隐去***
毕业学校: 涉及隐私,隐去***
专业: 内科学
毕业年份: 涉及隐私,隐去***
关键字: 短发夹RNA 表皮生长因子受体 人肺腺癌细胞 信号传导通路 多药耐药性 RNAi 肺癌
简介目录: 点击此处 免费索取本论文简介和目录>>
全文提供: 购买充值卡,就可下载本篇论文全文  

       论文发表:快速、低价、包过!发表论文就找论文天下

论文简介:由于肿瘤细胞的表皮生长因子受体(epidermal growth factorreceptor,EGFR)及其下游信号传导途径通路调控失常,相当部分的肿瘤细胞存在EGFR的过度表达并与肿瘤细胞的恶性行为密切相关。肺癌是全球恶性肿瘤死亡的主要原因,现已成为对人类威胁最大的恶性肿瘤。由于60%-80%的肺癌患者在诊断时已属晚期,失去手术治疗的机会,治疗多采用以化疗为主的多学科综合治疗。但原发/继发耐药仍是肺癌化疗失败、化疗后复发的重要原因。 本研究通过体外细胞培养的方法,观察靶向EGFR基因的shRNA表达载体对SPC-A1细胞存活率等的剂量效应和时间效应以及对EGFR基因表达调控的时间效应和剂量效应关系,并进一步研究EGFR基因表达下调后其下游的两条主要信号传导通路(Raf/MEK/ERK和PI3K/AKT通路)的变化和对三种在肿瘤多药耐药中起重要作用的基因(mdr1、lrp1和gst-π)的表达调控,以期从基因和蛋白水平上分析和探讨信号传导通路和相关耐药基因在shRNA下调SPC-A1细胞EGFR后所致化放疗增敏中可能的作用机制。 第一章 siRNA质粒抑制肺腺癌细胞株EGFR的表达及对细胞生物学行为的影响 目的:探讨siRNA质粒介导的短发夹RNA(shRNA)表达载体对人肺腺癌细胞株SPC-A1中EGFR基因表达调控的时间效应和剂量效应关系,并观察此表达载体对SPC-A1细胞存活率等细胞生物学特征的影响的剂量效应和时间效应。 方法:⑴抽提纯化质粒。⑵常规培养SPC-A1细胞,利用Lipofectamine 2000将pShEGFR载体和pShNEG载体转染入SPC-A细胞中。⑶用四氮唑蓝比色法(MTT法)检测不同剂量和时间时SPC-A1细胞的存活率。⑷用集落形成试验检测pShEGFR载体和pShNEG载体转染后SPC-A1细胞的集落形成能力。⑸用实时定量PCR(Quantitative Real-time PCR)法检测pShEGFR载体和pShNEG载体转染SPC-A1细胞后EGFR基因mRNA表达水平的时间变化。⑹用免疫蛋白印迹试验(Western blot)检测pShEGFR载体和pShNEG载体转染SPC-A1细胞后EGFR蛋白水平的变化。 结果:pShEGFR载体转染SPC-A1细胞后使其存活率和克隆形成率显著降低(分别降低达78.7%和68.8%),和对照组相比差异均有显著性(P<0.01),并呈一定的剂量效应和时间效应。pShEGFR载体转染SPC-A1细胞后第2天EGFR mRNA水平降至最低,抑制率为84.3%(P<0.01),此后随时间推移稍有升高,但仍显著低于对照组水平(P<0.01):转染pShEGFR载体后第2天EGFR蛋白水平即有显著降低,至第6天降至最低,抑制率达82.6%(P<0.01),此后稍有回升,但仍显著低于对照组水平(P<0.01)。 结论:⑴siRNA质粒介导的shRNA表达载体能有效的从mRNA水平和蛋白水平下调肺腺癌细胞株SPC-A1的EGFR的表达,并呈一定的剂量和时间效应。⑵siRNA质粒介导的shRNA表达载体转染SPC-A1细胞能显著影响SPC-A1细胞的存活率和集落形成能力等肿瘤细胞生物学行为,有发展成为肿瘤基因治疗新方法的前景。 第二章siRNA质粒抑制肺腺癌细胞株EGFR的表达对细胞内主要信号传导通路的影响 目的:分析细胞外信号调节蛋白激酶1/2(extracellularsignal-regulated protein kinase,ERK1/2)、磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,P13K)和丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(serine/threonine kinase,AKT)等在EGFR下游信号传导通路中起重要作用的节点蛋白在siRNA质粒抑制肺腺癌细胞株EGFR的表达后其基因mRNA水平、其总蛋白水平和磷酸化蛋白水平的变化,探讨其变化在SPC-A1细胞存活率降低、化放疗增敏中可能的机制。 方法:⑴使用Lipofectamine 2000将pShEGFR和pShNEG载体转染至SPC-A1细胞。⑵实时定量PCR法检测未转染组、Lipofectamine 2000处理组、pShNEG转染组和pShEGFR转染组在转染后各时间点的erk1、erk2、pi3k和akt基因的mRNA表达水平。⑶免疫印迹试验检测未转染组、Lipofectamine 2000处理组、pShNEG转染组和pShEGFR转染组转染后各时间点的ERK1、ERK2、P13K、AKT、p-ERK1、p-ERK2、p-PI3K和p-AKT蛋白的表达水平。 结果:与未转染组相比,pShEGFR转染组在转染后第2、8、10天可见erk1基因mRNA表达量明显升高(P<0.05),在转染后第6、10天可见akt基因mRNA表达量明显升高(P<0.05),erk2和pi3k基因mRNA表达量无显著变化(P>0.05)。与未转染组相比,ERK1、ERK2蛋白在pShNEG转染后第4天先明显降低,降低的幅度分别为39.3%、44.8%(P<0.05),第6天时回升至未转染组水平,第8、10天时明显升高,升高的幅度在30.7%-38.9%之间(P<0.05)。转染pShEGFR组p-ERK1、p-ERK2蛋白表达量在转染当天即开始出现明显降低,降低的幅度分别为49.8%、38.5%(P<0.05),第2天时进一步降低,至第4-8天时显著降低,降幅在97.4%-98.3%之间(P<0.01),第10天时p-ERK1表达水平略有回升,p-ERK2较第4-6天时有升高趋势,但较未转染组仍显著为低(p<0.05)。与未转染组相比,转染pShEGFR组P13K蛋白表达量在转染第4、6天时明显降低,降低幅度为37.9%、41.2%(P<0.05),其他时间点与未转染组无显著差异(P>0.05);转染pShEGFR组AKT蛋白表达量在转染第8天时明显降低,降低幅度为32.4%(P<0.05),其他时间点与未转染组无显著差异(P>0.05);与未转染组相比,转染pShEGFR组p-PI3K蛋白表达量在转染第6天时即出现显著降低,幅度为29.4%(P<0.05),第8、10天时继续降低,降幅分别为43.7%和58.3%(P<0.05)。转染pShEGFR组p-AKT蛋白表达量在转染第6天时显著降低,降幅为61.2%(P<0.05),第8、10天时继续降低,降幅分别为72.8%和85.6%(P<0.05)。pShNEG转染组上述各基因mRNA和蛋白变化均无统计学意义(P>0.05)。 结论:⑴pShEGFR转染SPC-A1细胞后erk1基因和akt基因mRNA水平发生了显著变化,ERK1/2、PI3K、AKT蛋白表达水平也发生了显著变化。⑵pShEGFR转染SPC-A1细胞后p-ERK1/2、p-PI3K、p-AKT等磷酸化蛋白的表达水平也发生了显著变化,但变化趋势与基因水平和总蛋白水平并不一致。 第三章 siRNA质粒抑制肺腺癌细胞株EGFR的表达对主要耐药基因的影响 目的:研究mdr1、lrp1和gst-π这三种在肿瘤细胞多药耐药中起重要作用的基因mRNA水平表达水平在siRNA质粒抑制肺腺癌细胞株EGFR表达后的变化,并探讨其变化在pShEGFR对SPC-A1细胞化疗增敏中可能的作用与意义。 方法:⑴使用Lipofectamine 2000将pShEGFR和pShNEG载体转染至SPC-A1细胞。⑵实时定量PCR法检测未转染组、Lipofectamine 2000处理组、pShNEG转染组和pShEGFR转染组在转染后各时间点的mdr1、lrp1和gst-π基因的mRNA表达水平。 结果:与未转染组SPC-A1细胞mdr1 mRNA表达量(0.000191±0.00003)相比,转染pShEGFR组在转染后2 d mdr1mRNA表达量(0.0000833±0.000014)显著降低,抑制率达56.4%(P<0.05),转染后第4、6天继续降低,降幅为78.1%和84.9%(P<0.01),至转染后第8、10天mdr1 mRNA表达量稍有回升,但仍明显低于未转染SPC-A1细胞,降幅为71.5%和76.2%(P<0.01)。与未转染组SPC-A1细胞lrp1 mRNA表达量(0.171±0.033)相比,转染pShEGFR组在转染后第2天lrp1 mRNA表达量(0.088±0.024)显著降低,抑制率达48.5%(P<0.05),转染后第4、6天继续降低,降幅为68.3%和77.7%(P<0.01),至转染后第8、10天lrp1 mRNA表达量较第4、6天稍有回升,但仍明显低于未转染SPC-A1细胞,降幅为73.1%(P<0.01)和41.8%(P<0.05)。gst-π mRNA表达量在pShEGFR转染前后差异无显著性(P>0.05)。pShNEG转染组上述各基因mRNA表达水平变化均无统计学意义(P>0.05)。 结论:⑴pShEGFR转染SPC-A1细胞后,mdr1基因和lrp1基因mRNA表达水平均发生了显著变化,其变化的原因可能与其上游信号传导通路蛋白的表达水平变化有关。⑵mdr1基因和lrp1基因mRNA表达水平的变化可能是pShEGFR转染SPC-A1细胞所致化疗增敏效应的主要分子机制。
本类相关论文:
·非小细胞肺癌血清分泌蛋白标志物筛选研究
·pll-DCIONP介导野生型p53基因转染对
·血清蛋白质组技术筛选人肺鳞癌相关抗原
·人肺腺癌蛋白质组学研究
·苯并芘肺内注射诱发大鼠肺肿瘤及绿茶的预防作用机
·DNA修复基因多态性、基因型—表型相关性与肺癌
·基质金属蛋白酶-9反义寡核苷酸对肺腺癌细胞靶向
·CBP基因在肺癌中的表达及其转染对肺腺癌SPC
·ERCC1,β-tubulinⅢ的表达与Ⅲ/Ⅳ
·GALV致融性糖蛋白转导肺腺癌细胞的抗肿瘤实验
短发夹RNA论文 表皮生长因子受体论文
·SOCS干预对IUGR大鼠骨骼肌细胞代谢的影响
·RNA干扰抑制c-Met基因表达对人喉癌Hep
·shRNA干扰SMYD3对肝癌细胞c-myc表
·RNA干扰抑制人结肠癌HT-29细胞COX-2
·过氧化物酶体增殖物活化受体γ基因静默对肝癌生物
·表皮生长因子受体(EGFR)和哺乳动物雷帕霉素
·表皮生长因子受体在缺血再灌注性心律失常和肾性高
·Kruppel样因子4(KLF4)在小鼠表皮干
·EGFR在三阴乳腺癌中的表达情况及对其预后的影
·LRIG1抑制EGFR入核增强顺铂对T24膀胱
人肺腺癌细胞论文 信号传导通路论文
·生姜醇提取物对人体肺腺癌细胞(A549)增殖和
·血管内皮抑素对人肺腺癌细胞A549及人脐静脉内
·地塞米松对顺铂引起的人肺腺癌细胞SPC-A1凋
·不同表型的鲍曼不动杆菌对人肺腺癌细胞的黏附及诱
·槲寄生碱对人肺腺癌A549细胞抑制作用的实验研
·Toll样受体9及其信号传导通路基因多态性与H
·STAT3信号传导通路与复发性自然流产关系的研
·胰腺癌差异蛋白的筛选及K-ras基因突变对蛋白
·XIAP抑制剂embelin对乳腺癌细胞生长抑
·人胃癌转移抑制相关microRNAs的筛选及其
多药耐药性论文 RNAi论文
·TcdA对K562/A02细胞增殖、凋亡和耐药
·Nrf2-ARE信号通路在肿瘤耐药中的作用及相
·白血病干细胞介导的白血病耐药性及小白菊内酯的干
·洛贝林逆转结肠癌细胞株HCT-8/VCR多药耐
·逆转肿瘤多药耐药性五味子软胶囊的药学研究
·东亚三角涡虫DjPsa基因的鉴定、表达及功能分
·CRMP-2的磷酸化对缺血再灌注脑损伤后神经再
·慢病毒介导shRNA稳定持续抑制口蹄疫病毒增殖
·镰形扇头蜱抗凝血分子在昆虫细胞中的重组表达和R
·白沙蒿铁蛋白基因的克隆及其RNAi载体的构建
   免费论文
公共管理 | 法学 | 理学 | 医药学
政治 | 社会学 | 文学 | 艺术 | 哲学
工学 | 计算机 | 文化 | 英语论文
经济学 | 财政 税收 | 证券金融
管理学 | 会计审计 | 工商管理 | 教育
财务管理 | 论文写作指导 | 应用文
   收费论文
马列毛邓 | 哲学宗教 | 社会科学
政治法律 | 军 事 | 经 济
文化科学教育体育 | 语言文字
文学 | 艺术 | 历史地理 | 自然科学
数理化 | 天文 | 生物科学 | 医药卫生
农业科学 | 工业技术 | 交通运输
航空航天 | 环境安全
   浏览历史

联系论文网 | 收费论文 | 发表论文 | 论文翻译 | 友情链接 | 全部分类 | 网站地图 | 期刊导航
版权所有 2008-2018 论文天下 www.lunwentianxia.com 京ICP备08104503号