免费论文
收费论文
发表论文
我要投稿
设为首页 招标网
联系我们
经济学|管理学|法学|计算机|医学|教育|文学|政治|艺术|哲学|更多 经济学|管理学|法律|计算机|医学|教育|文学|政治|艺术|哲学|更多
 论文搜索
  推荐服务: 论文发表 收费论文
期刊论文格式
毕业论文格式
期刊论文范文
毕业论文范文
论文致谢
毕业论文答辩
开题报告
论文选题
英文摘要书写
应用RNA干扰和蛋白质组学技术研究鼻咽癌细胞中p53的功能
中文名称: 应用RNA干扰和蛋白质组学技术研究鼻咽癌细胞中p53的功能
全文提供: 购买充值卡,就可下载本篇论文全文  
论文编号: 3101877收藏本论文】【我的收藏】【我要投稿
英文名称: Functional Characterization of p53 in Nasopharyngeal Carcinoma by Proteomics and RNAi Techniques
学位类型: 博士毕业论文
作者: 涉及隐私,隐去***  作者本人请参看权力声明>>
导师: 涉及隐私,隐去***
毕业学校: 涉及隐私,隐去***
专业: 病理与病理生理学
毕业年份: 涉及隐私,隐去***
关键字: p53 鼻咽癌 蛋白质组学 RNA干扰 二维电泳 MALDI-TOF-MS ESI-Q-TOF-MS p53基因表达
简介目录: 点击此处 免费索取本论文简介和目录>>
全文提供: 购买充值卡,就可下载本篇论文全文  

       论文发表:快速、低价、包过!发表论文就找论文天下

论文简介:鼻咽癌(Nasopharyngeal carcinoma,NPC)是常见的恶性肿瘤之一,好发于东南亚地区及我国南方各省市。病因学研究表明,鼻咽癌的发生与EB病毒感染、遗传易感性、饮食习惯及某些环境理化因素有关。鼻咽癌的发生是一个多基因参与、多步骤的复杂过程,其中抑癌基因失活和癌基因活化是肿瘤发生的重要原因。 p53基因是极为重要的抑瘤基因,是迄今发现的与人类肿瘤相关性最高的基因,它能与特异性DNA序列结合并激活靶基因转录,具有阻滞细胞周期、启动细胞凋亡、维持基因组稳定性的作用。p53基因失活是多种肿瘤发生发展过程中的重要事件,至少50%以上的人类肿瘤存在p53基因高频率突变失活。与其他肿瘤相比,鼻咽癌中很少发生p53基因突变,但60%以上的鼻咽癌组织和几乎100%的鼻咽癌细胞株有p53蛋白高表达/聚集。有研究报道,p53蛋白过表达/聚集与鼻咽癌组织增生、血管密度、颅底侵袭、颈部淋巴结转移和患者预后密切相关,提示鼻咽癌中过表达的p53蛋白功能可能异常或失活,不能发挥阻滞细胞周期和诱导凋亡的生物学作用,但至今过表达的p53蛋白在鼻咽癌所发挥的功能以及其聚集的机制仍然不清楚,有待进一步地研究。 RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术是一种靶基因表达沉默技术,也称为靶蛋白质剔除技术,在基因功能研究中它不仅可以和基因敲除技术媲美,而且具有快速、简便的优势,目前已广泛用于基因功能的研究。本研究应用RNAi技术稳定沉默鼻咽癌细胞系CNE2的p53基因的表达,通过分析打靶细胞中p53靶基因p21、MDM2表达及其细胞表型(细胞周期、细胞凋亡、细胞生物学特征)和放射敏感性的改变来探讨CNE2细胞中p53有无功能。然后采用高通量的蛋白质组学技术分离、鉴定稳定沉默p53基因表达的CNE2细胞株与空白载体转染的对照细胞株中差异表达的蛋白质,以寻找与p53功能相关的蛋白质。主要结果如下。 (一)成功地构建了表达siRNAs的质粒pSUPER/sip53,建立了稳定沉默p53基因表达的CNE2sip53鼻咽癌细胞系和空白载体转染的CNE2/pSUPER鼻咽癌细胞系。稳定沉默p53基因表达后,经实时荧光定量PCR检测发现,两株p53干扰效果较好的细胞株CNE2sip53-1与CNE2sip53-2中p53的表达分别下调达99.9%和97.5%,p53靶基因p21下调达79.5%和74.7%、MDM2下调达81.9%和77.1%。而且6Gy照射后,经Western blot检测,稳定干扰p53的细胞系与对照细胞系(未转染的CNE2和CNE2/pSUPER细胞)相比,p21和MDM2蛋白的表达水平均明显下降,结果说明CNE2细胞中的p53具有转录调控功能。 细胞生物学特性分析结果显示: ⒈与对照组细胞CNE2比较,CNE2sip53-1和CNE2sip53-2细胞周期进程加快,G1期减少,S期增加,G1:S比值分别下降了33.9%与26.4%(p<0.05),而CNE2/pSUPER细胞无明显改变; ⒉CNE2sip53-1、CNE2sip53-2的生长速度比对照细胞的生长速度明显加快; ⒊CNE2sip53-1、CNE2sip53-2的平板集落形成率分别为73%与72%,与对照组CNE2和CNE2/pSUPER的平板集落形成率43%与42%相比,有显著性差异(p<0.01); ⒋CNE2sip53-1、CNE2sip53-2的软琼脂集落形成率分别为37%与34.1%,与对照组CNE2和CNE2/pSUPER软琼脂集落形成率20.5%与22.1%相比,有显著性差异(p<0.01); ⒌与对照细胞比较,CNE2sip53-1细胞的裸鼠成瘤时间较早,且移植瘤体积明显增大(CNE2,1.22±0.25mm<'3>,n=6;CNE2/pSUPER,1.09±0.29mm<'3>,n=6;CNE2sip53-1,2.55±0.71mm<'3>,n=6,p<0.01)。 采用照射不同剂量后各组细胞的存活分数绘制细胞存活曲线,多靶单击模型拟合数据以及Hoechest33258染色观察细胞凋亡的方法,分析稳定沉默p53基因表达的CNE2鼻咽癌细胞的放疗敏感性的变化,结果显示:CNE2sip53-1,CNE2sip53-2细胞2Gy照射后的存活分数值分别为0.65和0.66,放射增敏比(SER)分别为0.79和0.78;而对照组CNE2和CNE2/pSUPER细胞2Gy照射后的存活分数值为0.41和0.40。6 Gy照射后CNE2sip53-1,CNE2sip53-2凋亡率分别为69.1%与68.4%,与对照组CNE2和CNE2/pSUPER凋亡率52.1%与53.2%相比,有显著性差异(p<0.05)。 结果说明:稳定干扰CNE2细胞中p53的表达后,细胞生长速度加快,体内和体外增殖的能力加强,而放疗敏感性降低,CNE2细胞中的p53具有抑瘤功能。 (二)采用双向聚丙烯酰胺凝胶电泳(Two-dimensional gelelectrophoresis,2D)技术、基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)分析和电喷雾串联质谱(ESI-Q-TOF-MS)分离鉴定了22个在CNE2sip53(即 CNE2sip53-1)与CNE2/pSUPER细胞中差异表达的蛋白质。其中14种蛋白质包括HSP27,14-3-3σ,GRP78,HSP70等在CNE2sip53细胞中表达上调,8种蛋白质包括hnRNP K,eIF4B,TPT1等在CNE2sip53细胞中表达下调。Western blot分析验证了部分蛋白质如HSP27、14-3-3σ和GRP75在两株细胞系中的差异表达水平。免疫共沉淀结合Western blot分析证实部分蛋白质如HSP27,HSP70,GRP75和GRP78为CNE2细胞中p53蛋白的相互作用蛋白质。此外,HSP27反义核酸抑制CNE2细胞HSP27的表达后能下调p53的表达。 结果说明:22个差异表达蛋白质可能与CNE2细胞的p53功能相关。 综上所述,稳定沉默鼻咽癌细胞系CNE2的p53基因表达可导致p53靶基因p21、MDM2表达及其细胞表型和放射敏感性的改变,这表明鼻咽癌细胞中高表达/聚集的p53蛋白仍然具有转录调控功能和抑瘤作用。采用蛋白质组技术从CNE2细胞中鉴定了22个可能与p53功能相关的蛋白质,其中HSP27,HSP70,GRP75和GRP78可能通过与p53蛋白相互作用引起CNE2细胞中的p53蛋白高表达/聚集。研究结果不仅证实鼻咽癌细胞中高表达的p53蛋白具有抑瘤功能,而且为研究鼻咽癌的p53蛋白聚集的机制提供了重要依据和线索。
本类相关论文:
·染色体3p21鼻咽癌易感基因区LTF基因的筛查
·基于MicroRNA的鼻咽癌基因治疗初步研究
·NAG7基因通过雌激素受体促进鼻咽癌细胞运动侵
·鼻咽癌抑瘤基因BRD7的转录调控研究
·放射敏感性肿瘤自杀基因载体对鼻咽癌杀伤作用的研
·HLA区间11个遗传标记多态性与鼻咽癌的相关性
·siRNA抑制hTERT及VEGF表达治疗鼻咽
·表皮生长因子受体对鼻咽癌细胞放射敏感性的影响
·鼻咽癌放射抵抗机制的蛋白质组学研究
·人源性肺表面活性物质制备和研究
p53论文 鼻咽癌论文
·转录因子p53、Sox2的翻译后修饰调控研究
·Hs-MB型电化学活性开关分子信标的研制及其应
·紫外照射后p53与septin2的相互调节作用
·p53在日本脑炎病毒复制及其致病性中的作用
·GRIM-19与HPV18 E6的相互作用促子
·5p15.33 TERT-CLPTM1L基因区
·中药配合放化疗对鼻咽癌患者远期疗效的影响
·鼻咽癌调强放疗中再计划的初步研究
·RNA干扰原癌基因c-Met对鼻咽癌作用的影响
·鼻咽癌患者放、化疗期间生存质量及其影响因素研究
蛋白质组学论文 RNA干扰论文
·动物毒素数据库的建立与质谱数据提取方法研究
·不同氮素水平下烤烟苗期生理特性及差异蛋白组学研
·RNA干扰结肠癌细胞HIF1-α基因的蛋白质组
·慢病毒介导STMN1基因沉默对白血病K562细
·重金属镉对睾丸间质细胞的毒理作用分子机制研究
·Beta-连环蛋白与人卵巢癌细胞顺铂耐药相关性
·慢病毒载体介导的RNAi抑制牛整联蛋白亚基αv
·NYD-SP15生物学功能研究及FEN对成年I
·RNA干扰结肠癌细胞HIF1-α基因的蛋白质组
·MEPE/OF45,SERPINB2及RB相关
二维电泳论文 MALDI-TOF-MS论文
·蓝隐藻藻蓝蛋白的分离纯化及结构与性质的研究
·多管藻藻胆体中R-藻红蛋白和R-藻蓝蛋白的光谱
·基于微流控芯片的二维电泳分离及蛋白质预富集研究
·基于紫外诱导银杏叶次生代谢产物及其差异蛋白质组
·鼻咽癌前病变证素计量辩证规范及其相关蛋白质组学
·肝癌潜在标志物补体C3的筛选和验证的研究
·棉花纤维不同发育阶段蛋白质组的比较分析
·矽尘暴露人群血清生物标志物的筛选及其相关功能的
·杂交水稻盐胁迫响应差异蛋白质组分析
·解淀粉芽孢杆菌YN-1抑制植物病原真菌活性物质
   免费论文
公共管理 | 法学 | 理学 | 医药学
政治 | 社会学 | 文学 | 艺术 | 哲学
工学 | 计算机 | 文化 | 英语论文
经济学 | 财政 税收 | 证券金融
管理学 | 会计审计 | 工商管理 | 教育
财务管理 | 论文写作指导 | 应用文
   收费论文
马列毛邓 | 哲学宗教 | 社会科学
政治法律 | 军 事 | 经 济
文化科学教育体育 | 语言文字
文学 | 艺术 | 历史地理 | 自然科学
数理化 | 天文 | 生物科学 | 医药卫生
农业科学 | 工业技术 | 交通运输
航空航天 | 环境安全
   浏览历史

联系论文网 | 收费论文 | 发表论文 | 论文翻译 | 友情链接 | 全部分类 | 网站地图 | 期刊导航
版权所有 2008-2018 论文天下 www.lunwentianxia.com 京ICP备08104503号