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应激适应中单胺类神经递质的作用及5-HT对海马GR/MR和BDNF表达的影响
中文名称: 应激适应中单胺类神经递质的作用及5-HT对海马GR/MR和BDNF表达的影响
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论文编号: 3101867收藏本论文】【我的收藏】【我要投稿
英文名称: The Role of Monoamine Neurotransmitter and the Effect of the Sertonin on the GR/MR and BDNF Expression of the Hippocampus during the Stress Adaption
学位类型: 博士毕业论文
作者: 涉及隐私,隐去***  作者本人请参看权力声明>>
导师: 涉及隐私,隐去***
毕业学校: 涉及隐私,隐去***
专业: 精神病与精神卫生学
毕业年份: 涉及隐私,隐去***
关键字: 应激 神经递质 高效液相色谱分析 对氯苯丙胺 5-HT 双因素方差分析 5-HT1A受体 8-OH-DPAT WAY100635 海马
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论文简介:第一章单次及重复限制性应激对大鼠前额叶、海马、下丘脑单胺类递质水平及其代谢产物的影响。 目的:通过测评单次及重复限制性应激中,前额叶、海马、下丘脑等脑区单胺类神经递质及其代谢产物的水平,探索单胺类神经递质在急、慢性应激适应中的作用。 方法 24只雄性SD大鼠随机分为正常对照组、单次应激组和重复应激组,每组8只。采用限制应激模型(6小时/次/天),单次应激组给予1次应激,重复应激组给予连续应激10天。在最后一次应激24小时后进行行为学测试,测试后立即断头取脑,采用库仑阵列电化学高效液相色谱分析方法分析前额叶、海马和下丘脑组织匀浆的单胺类神经递质及其代谢产物的浓度。统计分析采用单因素方差分析及多重两两比较。 结果:旷场实验中,单次应激组在中央格停留的时间明显低于对照组(P<0.01),重复应激组在中央格停留的时间与对照组无显著性差异(P>0.05);高架十字迷宫实验中,单次应激组在闭臂停留的时间高于对照组(P<0.01),在开臂停留的时间低于对照组(P<0.01):重复应激组大鼠在开/闭臂停留的时间与对照组无显著性差异(P>0.05)。递质分析显示,单次应激组前额叶、海马 5-HT 及其代谢产物5-HIAA 的含量高于对照组(P<0.01),前额叶和下丘脑的MHPG水平、下丘脑的NE水平高于对照组(P<0.01或P<0.05);重复应激组海马的5-HT及5-HIAA高于对照组(P<0.01),前额叶、下丘脑5-HT及5-HIAA 与对照组无显著性差异(P>0.05);前额叶DA水平低于对照组(P<0.01);海马的儿茶酚胺类递质浓度及代谢产物分别在对照组与单次应激组、对照组与重复应激组之间差异无统计学意义(P>0.05)。 结论:⑴急性应激能增加大鼠的焦虑水平,产生明显的应激反应,而重复暴露于相同负性事件能够导致对该刺激的适应。⑵急、慢性应激引起的海马5-HT及其代谢产物水平的增加,可能是个体对应激适应的生物学基础。 第二章重复应激对5-HT耗竭大鼠情绪认知及其海马GR、MR和BDNF表达的影响。 目的:通过研究慢性限制应激对5-HT耗竭大鼠情绪、认知等行为的影响及对大鼠海马GR/MR受体、BDNF mRNA表达的影响,进一步验证5-HT在应激适应中的作用,探索应激过程中5-HT对海马作用的分子机制。 方法:成年SD大鼠,按体重匹配原则随机分为对照组、应激组、5-HT 耗竭组和5-HT耗竭应激等4组,使用对氯苯丙胺(p-PCA,200mg/kg)给予连续2天腹腔注射以耗竭大鼠体内的5-HT。采用限制应激模型(6小时/天,连续10天)。最后一次应激24小时后,采用旷场实验、高架十字迷宫、糖水偏好实验、强迫游泳实验和水迷宫测试等进行行为学测试评估大鼠的情绪及认知水平。采用免疫组化方法比较各组间海马各区 GR/MR蛋白免疫反应性;采用原位杂交方法比较各组间海马各区BDNF mRNA 的表达情况。统计分析采用双因素方差分析(Two-way ANOVA)。 结果: 5-HT 耗竭应激大鼠相对于正常应激大鼠体重增加较少;旷场实验中,在中央格的停留时间较少;高架十字迷宫实验中,在开臂停留的时间较少,在闭臂停留的时间较多;糖水实验中,消耗的糖水较少;强迫游泳实验中,不动的时间较长。另外,在水迷宫测试的第3、4天,5-HT 耗竭应激大鼠比正常应激大鼠平均逃离潜伏期明显增加,而测试时,在目标象限停留的时间和穿越平台的次数明显减少。免疫组化显示,应激组海马CA1(p<0.05)、CA2(p<0.05)、CA3(p<0.01)、CA4(19<0.01)和DG(p<0.01)区GR免疫反应性分别高于对照组的CA1、CA2、CA3、CA4和DG,在5-HT耗竭组与对照组、5-HT 耗竭组与5-HT耗竭/应激组之间差异无统计学意义;海马各区MR灰度值在上述4组间均无显著性差异(P>0.05)。原位杂交显示,5-HT耗竭/应激组BDNF mRNA在海马CA1、CA2、CA3、CA4和DG各区的表达分别低于耗竭组的CA1、 CA2、CA3、CA4和DG(p<0.01).在应激组与对照组、5-HT耗竭组与对照组之间BDNFmRNA在海马各区的灰度值无显著性差异(P>0.05)。 结论:⑴本研究表明5-HT耗竭使大鼠不能对重复应激适应,应激后抑郁、焦虑水平显著升高,且易导致学习、记忆等认知功能受损。⑵5-HT耗竭大鼠在重复应激反应中,海马GR受体功能受到抑制、BDNF mRNA的表达下调,提示可能是5-HT水平低下个体,对应激适应能力下降而增加应激相关精神障碍易感性的生物学基础。 第三章 5-HT1A 受体激动剂对5-HT耗竭重复限制应激大鼠海马GR、MR和BDNF表达的影响。 目的:通过皮下注射5-HT1A 受体激动剂8-OH-DPAT和拮抗剂WAY100635,研究突触后5-HT1A 受体功能对5-HT耗竭重复应激大鼠海马GR、MR和BDNF mRNA表达的影响。 方法:将成年SD大鼠按体重匹配原则随机分为以下7组:对照组(Control)、应激组(Stress)、8-OH-DPAT组(DPAT)、应激+8-OH-DPAT 组(Stress+DPAT)、WAY100635(WAY100635)、应激+WAY100635 组(Stress+WAY100635)、应激+WAY100635+8-OH-DPAT 组(Stress+WAY100635+DPAT)。8-OH-DPAT每次于应激前半小时皮下注射200ug/kg,WAY100635每次于应激前15分钟皮下注射300ug/kg,对照组给予2ml/kg 的生理盐水皮下注射(给药时间同8-OH-DPALT)。应激模式采用重复限制应激。采用免疫组化方法比较各组间海马各区GR/MR蛋白免疫反应性,采用原位杂交方法比较各组间海马各区BDNF mRNA的表达情况。统计采分析用单因素方差分析及多重两两比较。 结果:⑴8-OH-DPAT 组体重增加值高于对照组(P<0.01),应激+8-OH-DPAT组体重增加值高于应激组(P<0.01),其余各组间差异无统计学意义(P>0.05)。⑵8-OH-DPAT能显著减少5-HT耗竭大鼠及 5-HT 耗竭应激大鼠在旷场实验和高架十字迷宫实验中的焦虑水平,并能使5-HT耗竭大鼠及5-HT耗竭应激大鼠的糖水消耗量增加,减少在强迫游泳实验中总不动时间,而给予WAY100635则能阻断8-OH-DPAT 的上述作用。在水迷宫实验中,各组找到平台的平均潜伏期、在目标象限的时间和穿越平台的次数等差异均无统计学意义(P>0.05)。⑶免疫组化显示,在海马CA1、CA2及CA3区,应激+8-OH-DPAT 组的GR灰度值低于应激组(P<0.05)。在其余各对照组之间、各应激组之间海马各区中,GR灰度值差异无统计学意义(P>0.05);各对照组之间、各应激组之间海马各区MR灰度值差异无统计学意义(P>0.05)。原位杂交显示,在海马CA1、CA2、CA3、CA4及DG区,应激+8-OH-DPAT组的BDNF mRNA灰度值低于应激组(P<0.05)。其余对照组之间、各应激组之间海马各区的BDNFmRNA 灰度值差异无统计学意义(P>0.05)。 结论:突触后5-HT1A 受体的激活有利于保护海马,促使其发挥正常的功能,能够缓解应激引起的焦虑、抑郁行为,从而促进对慢性应激的适应。
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