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纳米细菌对兔主动脉血管平滑肌细胞生物学形态的影响和机制探讨
中文名称: 纳米细菌对兔主动脉血管平滑肌细胞生物学形态的影响和机制探讨
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论文编号: 3101866收藏本论文】【我的收藏】【我要投稿
英文名称: The Investigation of Morphological Effects and Mechanisms of Nanobacteria on Rabbit Artery Smooth Muscle Cell
学位类型: 博士毕业论文
作者: 涉及隐私,隐去***  作者本人请参看权力声明>>
导师: 涉及隐私,隐去***
毕业学校: 涉及隐私,隐去***
专业: 外科学
毕业年份: 涉及隐私,隐去***
关键字: 纳米细菌 免疫荧光 动脉粥样硬化斑块 血管平滑肌细胞 坏死 MTT 流式细胞仪 自由基 SOD MDA LDH 免疫荧光法
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论文简介:第一部分动脉粥样硬化斑块中纳米细菌的培养与鉴定。 目的:研究动脉粥样硬化斑块中是否存在纳米细菌,并对其进行鉴定。 方法:将手术中采获的12例动脉粥样硬化斑块及12例正常动脉血管组织研磨,取上清液培养。培养8周后收集培养瓶底的白色粉末,用纳米细菌单克隆抗体间接免疫荧光法对其进行鉴定,并利用电镜进一步观察其形状。对收获的纳米细菌进行再培养,每周检测一次培养基上清液K<'+>、Na<'+>、Cr<'->、Mg<'2+>、Ca<'2+>、P<'3->及葡萄糖的浓度。 结果:12 例动脉粥样硬化斑块中10例纳米细菌检测阳性,2 例阴性,12例正常动脉血管组织中1例纳米细菌检测阳性,11例阴性,卡方检验存在显著性差异(P<0.05)。纳米细菌单克隆抗体间接免疫荧光法检测时,纳米细菌可发出绿色荧光,透射电镜下测量纳米细菌直径大小约为100~300nm。培养过程中上清液的K<'+>、Na<'+>、Cr<'->、Mg<'2+>及葡萄糖的浓度无明显变化(P>0.05);而Ca<'2+>、P<'3->浓度进行性下降,每周检测结果比较存在显著性差异(P<0.05)。 结论:动脉粥样硬化斑块中存在纳米细菌,它可能导致粥样硬化斑块不稳定。纳米细菌单克隆抗体间接免疫荧光法可以帮助鉴定纳米细菌。纳米细菌在培养过程中消耗Ca<'2+>、P<'3->而不利用K<'+>、Na<'+>、Cl<'->、Mg<'2+>及葡萄糖。 第二部分纳米细菌对免主动脉血管平滑肌细胞生物学形态的影响。 目的:观察纳米细菌对兔主动脉血管平滑肌细胞是否具有损伤作用及盐酸四环素干预能否减轻这种损伤。 方法:光镜下观察不同浓度纳米细菌攻击及1.95μg/ml 盐酸四环素干预48h和72h后的兔主动脉血管平滑肌细胞形态学改变;四唑盐(MTT)比色实验检测不同浓度纳米细菌攻击和1.95μg/ml盐酸四环素干预48h和72h后的平滑肌细胞存活和增殖情况;流式细胞仪检测不同浓度纳米细菌攻击和 1.95μg/ml盐酸四环素干预24h后的平滑肌细胞凋亡情况。 结果:不同浓度纳米细菌攻击后血管平滑肌细胞形态存在不同程度改变,极低浓度时(OD=0.001,0.005)无明显变化,随浓度增加和时间延长,平滑肌细胞逐渐出现空泡样变,轮廓不清,细胞膜损伤破裂,严重时血管平滑肌细胞被完全破坏。盐酸四环素干预后发现极低浓度(OD=0.001,0.005)和低浓度(OD=0.01,0.03,0.05)的纳米细菌攻击对血管平滑肌细胞形态学无明显影响,但高浓度纳米细菌(OD=0.1,0.3)仍可导致大部分平滑肌细胞损伤和坏死。不同浓度纳米细菌攻击48h后:除OD=0.001组外各浓度组MTT值低于对照组MTT值,存在显著性差异(P<0.05),各浓度组MTT值之间比较存在显著性差异(P<0.05)。攻击72h后:各浓度组MTT值均低于对照组MTT值,存在显著性差异(P<0.05),OD=0.1组和OD=0.3组的MTT值比较无显著性差异(P>0.05),其余各浓度组之间比较存在显著性差异(P<0.05)。每一浓度纳米细菌攻击48h和72h后:OD=0.001,0.005时72h的MTT值高于48h的MTT值,存在显著性差异(P<0.05)。OD=0.01,0.03,0.05,0.1时72h的MTT值低于48h的MTT值,存在显著性差异(P<0.05)。OD=0.3时48h的MTT值和72h的MTT值比较无显著性差异。盐酸四环素干预48h及72h后:纳米细菌(OD=0.001,0.005,0.01,0.03,0.05,0.1)攻击后的平滑肌细胞MTT值低于盐酸四环素干预后MTT值,统计学比较存在显著性差异(P<0.05)。纳米细菌(OD=0.3)攻击后的血管平滑肌细胞MTT值与盐酸四环素千预后MTT值比较未见显著性差异(P>0.05)。流式细胞仪检测发现:不同浓度纳米细菌攻击24h后,未见明显血管平滑肌细胞凋亡,盐酸四环素干预后各浓度组也未见明显细胞凋亡。 结论:纳米细菌可以损伤兔主动脉血管平滑肌细胞,浓度越高,攻击时间越长,损伤程度越重;短时间内(24小时)被纳米细菌攻击的血管平滑肌细胞的死亡方式是坏死而不是凋亡;盐酸四环素可以减轻纳米细菌对血管平滑肌细胞的损伤。 第三部分纳米细菌损伤兔主动脉血管平滑肌细胞机制的初步探讨。 目的:从自由基的角度初步探讨纳米细菌对兔主动脉血管平滑肌细胞的损伤机制。 方法:0.5Mcfarland 浓度纳米细菌攻击兔主动脉血管平滑肌细胞,分别在0、12、24、48、72小时各时间点取培养基上清液,按照试剂盒说明检测乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)、超氧化物歧化酶 (superoxide dismutase,SOD)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)和一氧化氮(nitric oxide,NO)的变化。 结果:随着攻击时间的延长,LDH 浓度逐渐升高,与对照组比较存在显著性差异,各时间点比较存在显著性差异(P<0.05);SOD的活性随攻击时间延长而逐渐升高,与对照组比较存在显著性差异,各时间点比较存在显著性差异(P<0.05);MDA含量无明显变化(P>0.05);NO含量逐渐升高,24小时达到高峰后逐渐下降,各时间点浓度与0小时比较存在显著性差异,各时间点之间比较存在显著性差异(P<0.05)。 结论:纳米细菌攻击兔主动脉血管平滑肌细胞时,可能没有氧自由基的参与;兔主动脉血管平滑肌细胞在受到纳米细菌攻击时,自身分泌了SOD、NO;NO可能参与了平滑肌细胞的损伤。
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