免费论文
收费论文
发表论文
我要投稿
设为首页 招标网
联系我们
经济学|管理学|法学|计算机|医学|教育|文学|政治|艺术|哲学|更多 经济学|管理学|法律|计算机|医学|教育|文学|政治|艺术|哲学|更多
 论文搜索
  推荐服务: 论文发表 收费论文
期刊论文格式
毕业论文格式
期刊论文范文
毕业论文范文
论文致谢
毕业论文答辩
开题报告
论文选题
英文摘要书写
靶向Plk1的siRNA对肝癌BEL-7402细胞株生物学行为的影响及增强长春新碱化疗敏感性的实验研究
中文名称: 靶向Plk1的siRNA对肝癌BEL-7402细胞株生物学行为的影响及增强长春新碱化疗敏感性的实验研究
全文提供: 购买充值卡,就可下载本篇论文全文  
论文编号: 3101673收藏本论文】【我的收藏】【我要投稿
英文名称: Study of the Influence of siRNA Targeting Plk1 Gene on the Biological Behaviors and Enhancement of Vincristine Chemotherapeutic Sensitivity to Hepatocellular Carcinoma Cell Line BEL-7402
学位类型: 博士毕业论文
作者: 涉及隐私,隐去***  作者本人请参看权力声明>>
导师: 涉及隐私,隐去***
毕业学校: 涉及隐私,隐去***
专业: 外科学
毕业年份: 涉及隐私,隐去***
关键字: 原发性肝癌 Plk1 半定量RT-PCR Western blot 短发夹状RNA RNA干扰 表达载体 BEL-7402 P53 Cdc25c 长春新碱 化疗
简介目录: 点击此处 免费索取本论文简介和目录>>
全文提供: 购买充值卡,就可下载本篇论文全文  

       论文发表:快速、低价、包过!发表论文就找论文天下

论文简介:研究背景:原发性肝癌是(以下简称肝癌),是我国常见的恶性肿瘤之一,以手术为主联合化疗、放疗是目前治疗肝癌的主要模式。由于肝癌对化疗不太敏感,因此,如何降低化疗药物的毒性并增强化疗效果,值得进一步深入地研究。而随着分子生物学技术的发展,利用基因研究的进展对肝癌进行基因治疗,为肝癌的治疗提供了新的策略。 Hk1(Polo-like kinase 1)基因属于有丝分裂丝氨酸/苏氨酸激酶家族PlKs(Polo-like kinases)中的一员,是G<,2>/M期DNA损伤检测点重要激酶,对中心体的成熟,双极纺锤体的形成,及胞浆分裂等起重要作用。PR1作为参与细胞分裂启动和正性推进者,在细胞增殖过程中起重要作用。在多种肿瘤中,P1k1常表现为过表达并与不良预后密切相关。肝癌往往发生于慢性肝病,如肝硬化和慢性肝炎,这类疾病由于肝脏损伤后伴有持续的肝细胞增殖,细胞增殖加速使肝细胞增殖周期中的调控基因更容易发生随机改变,同时细胞增殖加速也容易使慢性肝病过程中致病因子所导致的DNA突变得以保留并迅速克隆性扩张,最后导致肝癌的发生。因此,我们选定PR1作为潜在的肿瘤基因治疗靶点,调控G<,2>/M期的DNA损伤检测点功能,以期达到抑制肿瘤生长、增殖的目的。 RNA干扰(RNA interferenCe,RNAi)技术是近年来出现的一种高效地封闭特异性基因的新技术,近年来无论在功能基因组研究还是肿瘤的基因治疗等方面得到广泛的应用。RNAi是指内源性或外源性双链RNA(dsRNA)介导细胞内的Mrna发生特异性降解,导致靶基因的表达沉默,产生相应的功能表型缺失。因此,运用RNA干扰技术抑制肝癌细胞内异常表达的Plkl基因从而影响其生物学行为并增强化疗药物敏感性可能为肝癌的治疗带来新的思路。 第一章 P1k1在肝癌组织中表达及临床意义。 目的:探讨P1k1在原发性肝细胞性肝癌中的表达及其意义。 方法:用半定量RT-PCR、Western blot的方法检测21例原发性肝细胞性肝癌中P1k1的表达情况,并分析其与肝癌临床病理因素的关系。同时取肝硬化及正常肝组织各7例做对照。 结果:肝癌组织中P1k1mRNA表达比值(P1k1/β-actin)为0.572±0.144,明显高于肝硬化组织中的0.250±0.057和正常肝组织的0.218±0.073(P<0.01)。P1k1 Mrna表达水平在肿瘤直径大于5cm组中为0.641±0.110,而在肿瘤直径小于5cm组中为0.458±0.120,两组之间比较有统计学差异(P<0.01)。其在有门静脉癌栓患者中的表达为0.652±0.107,明显高于无门静脉癌栓者中的表达0.522±0.144。(P<0.05)。而与有无包膜,肿瘤病理分级和AFP阳性与否无明显相关。肝癌组织P1k1蛋白表达明显高于肝硬化及正常肝组织中的P1k1蛋白表达量。 结论: 1.原发性肝癌组织中P1k1mRNA及蛋白表达均明显增加; 2.P1k1的表达高低与原发性肝癌的肿瘤直径大小及脉管侵犯有明显相关。 第二章靶向P1k1的shRNA真核表达载体构建和鉴定。 目的:构建靶向P1k1的短发夹状RNA(shRNA)真核表达载体。 方法:设计合成两条针对P1k1的短发夹状RNA.及一条阴性对照无意义短发夹状RNA,将其导入pGenesil-2质粒中。用菌液PCR、质粒双酶切及重组质粒测序的方法,检验构建载体的正确性。 结果:分别合成针对P1k1基因251-269及1396—1417位点的siRNA序列及阴性序列,成功将其导入真核表达载体,经菌液PCR、质粒双酶切及重组质粒测序,均显示siRNA序列已成功装入载体。 结论:构建携带针对P1k1基因shRNA真核表达载体成功。 第三章靶向P1k1的siRNA对肝癌BEL-7402细胞株生物学行为的影响。 目的:利用RNA(RNAi)干扰技术,研究表达P1k1的短发夹RNA(shRNA)载体对肝癌细胞株BEL-7402生物学行为的影响。 方法:根据靶基因的不同区域设计两组shRNA以及一个阴性对照,利用电穿孔法转染入肝癌细胞株BEL-7402,获得稳定表达的克隆后,半定量RT-PCR检测肝癌细胞株BEL-7402的P1k1、Cdc25C、p53mRNA的变化,Western blot检测P1k1蛋白的表达,MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期变化。 结果:利用电穿孔将载体转入肝癌细胞株BEL-7402,利用G418筛选,获得稳定表达的克隆。半定量RT-PCR检测转染shRNA载体的BEL-7402细胞的P1k1表达情况,P1k1siRNA-251,P1klsiRNA-1396,P1k1siRNA-hk转染组与对照组分别为0.184±0.014;0.218±0.043:0.683±0.071:0.729±0.053。检测p53mRNA分别为0.425±0.052;0.400±0.056;0.180±0.027;0.174±0.027。检测Cdc25C Mrna分别为0.387±0.083;0.353±0.059;0.816±0.052;0.837±0.065。Western blot检测BEL--7402细胞转染shRNA载体后的Hkl蛋白的表达分别为0.032±0.007、0.040±0.008、0.272±0.041、0.278±0.053。MTT检测发现转染shRNA载体后BEL--7402细胞增殖明显减慢。细胞周期检测证实转染P1k1siRNA可以引起BEL-7402细胞G0/G1期减少,G<,2>/CM期增高,而对S期影响不大。 结论: 1.成功筛选出两条能特异而高效抑制PRl基因表达的shRN,为进一步研究该基因的功能和作用机制提供了新的手段; 2.用电穿孔法筛选出稳定表达PRl siRNA的载体的BEL-7402细胞克隆,发现其可以显著抑制Hkl Mrna的表达;并能引起p53mRNA的升高与Cdc25C Mrna的下降; 3.用电穿孔法筛选出稳定表达PRl siRNA的载体的BEL-7402细胞克隆,发现其可以显著抑制Hkl蛋白的表达; 4.BEL-7402细胞转染PRl siRNA.载体后,可明显抑制细胞增殖;改变细胞周期分布。 第四章靶向P1k1的siRNA对肝癌BEL-7402细胞株化疗敏感性影响的实验研究。 目的:利用RNA(RNAi)干扰技术,研究表达靶向P1k1的短发夹RNA(shRNA)载体对肝癌细胞株BEL-7402化疗敏感性的影响。 方法:将P1klsiRNA-251,P1k1siRNA-1396,P1k1siRNA-hk转染组与对照组的BEL-7402细胞作为研究对象,用长春新碱处理细胞后,用MTT法检测四组细胞的生长抑制率,计算IC<,60>值,流式细胞仪和Hoechest染色法检测各组细胞凋亡。 结果:长春新碱处理后, P1k1siRNA-251组和P1k1siRNA-1396组与BEL7402组之间的生长抑制率有显著性差异(P<0.01)。P1k1siRNA-hk组与BEL7402组之间的生长抑制率无显著性差异(P>0.05)。P1k1siRNA-251组的IC<,50>为14.541ug/ml,较P1k1siRNA-hk组IC<,50>22.380ug/ml降低35.02%,较BEL7402组IC<,50>21.176 ug/ml降低31.33%;而P1k1siRNA-1396组的IC<,50>为13.413ug/ml,较P1klsiRNA-hk组IC<,50>降低40.07%,较BEL7402组IC5。降低36.66%。5ug/ml浓度长春新碱作用24h后,P1k1siRNA-251组和P1k1siRNA-1396组凋亡指数分别为19.09%±3.97%、19.80%±5.47%明显高于P1k1siRNA-hk组和BEL7402组(P<0.01)。 结论:利用RNA干扰沉默肝癌细胞P1k1基因能增加长春新碱的化疗敏感性,值得进一步研究。
本类相关论文:
·应用ShRNA研究HBX基因表达和三氧化二砷对
·缺氧对人肝癌细胞株BEL-7402多药耐药性的
·表阿霉素聚氰基丙烯酸正丁酯磁性纳米粒的研制及用
·转化生长因子β1-Smad信号转导通路在肝细胞
·亚砷酸肝动脉灌注联合中药对中晚期肝癌干预的研究
·磁性氧化酚砷纳米微球制备与抗肝癌研究
·节拍性化疗及贝伐单抗治疗肝癌裸鼠模型的实验研究
·纳米金或IL-12抑制血管内皮细胞增殖和H22
·PLA-CS纳米粒介导Survivin反义寡核
·RhoC调控肝细胞癌侵袭转移和新生血管生成的体
原发性肝癌论文 Plk1论文
·血管生成素在慢性肝炎发展到肝癌中的作用研究
·三氧化二砷对原发性肝癌TACE术后血管内皮生长
·微囊藻毒素与原发性肝癌的关系研究
·原发性肝癌RUNX3的表达及启动子异常甲基化研
·慢性乙型肝炎相关肝癌发生、发展过程中的表观遗传
·肺癌PLK1基因多态性及siRNA干预的研究
·RLK1和Survivin在肝细胞癌组织中的表
·端粒相关蛋白TRF1和PinX1的翻译后修饰研
·PLK1在肝细胞、肝卵圆细胞及肝癌细胞中的差异
·PLK1在食管鳞状细胞癌中的表达变化及其作用机
半定量RT-PCR论文 Western blot论文
·冰凌花转录因子AaDREB1基因的表达分析及功
·花生文库构建和逆境胁迫基因的分离与表达鉴定
·油桐花芽分化期外源激素对Tunglfy表达特性
·芜菁胚发育相关基因BcNAC2的功能分析
·油茶种子成熟调控蛋白基因的分离克隆及功能研究
·苏云金芽胞杆菌cry1Ac基因与球孢白僵菌CD
·针刺“内关”穴对快速性心律失常大鼠心电及心肌G
·APE1血清学检测方法的建立及其在肺癌诊断中的
·子宫内膜浆液性癌潜在性癌前病变及其应用研究
·Pokemon在弥漫性大B细胞淋巴瘤和多发性骨
短发夹状RNA论文 RNA干扰论文
·RNA干扰沉默PDGF-D基因对胃癌细胞SGC
·shRNA抑制人子宫内膜癌细胞株Ishikaw
·CCL21/CCR7在结肠癌侵袭与转移过程中生
·TIM-3在免疫性血小板减少症发病机制中的初步
·联合应用Mcl-1的shRNA重组质粒增强人肝
·Beta-连环蛋白与人卵巢癌细胞顺铂耐药相关性
·慢病毒载体介导的RNAi抑制牛整联蛋白亚基αv
·NYD-SP15生物学功能研究及FEN对成年I
·RNA干扰结肠癌细胞HIF1-α基因的蛋白质组
·MEPE/OF45,SERPINB2及RB相关
   免费论文
公共管理 | 法学 | 理学 | 医药学
政治 | 社会学 | 文学 | 艺术 | 哲学
工学 | 计算机 | 文化 | 英语论文
经济学 | 财政 税收 | 证券金融
管理学 | 会计审计 | 工商管理 | 教育
财务管理 | 论文写作指导 | 应用文
   收费论文
马列毛邓 | 哲学宗教 | 社会科学
政治法律 | 军 事 | 经 济
文化科学教育体育 | 语言文字
文学 | 艺术 | 历史地理 | 自然科学
数理化 | 天文 | 生物科学 | 医药卫生
农业科学 | 工业技术 | 交通运输
航空航天 | 环境安全
   浏览历史

联系论文网 | 收费论文 | 发表论文 | 论文翻译 | 友情链接 | 全部分类 | 网站地图 | 期刊导航
版权所有 2008-2018 论文天下 www.lunwentianxia.com 京ICP备08104503号