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血红素加氧酶-1对大鼠肝移植术后肝脏保护作用的研究
中文名称: 血红素加氧酶-1对大鼠肝移植术后肝脏保护作用的研究
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论文编号: 3101501收藏本论文】【我的收藏】【我要投稿
英文名称: Experimental Study on HO-1 to Prevent Liver Allograft from Damage after Transplantation
学位类型: 博士毕业论文
作者: 涉及隐私,隐去***  作者本人请参看权力声明>>
导师: 涉及隐私,隐去***
毕业学校: 涉及隐私,隐去***
专业: 外科学
毕业年份: 涉及隐私,隐去***
关键字: 肝移植 血红素氧化酶-1 基因转染 腺病毒 血红素氧化酶 肝脏保护 血红素加氧酶
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论文简介:第一部分,目的:利用套管技术建立稳定的大鼠原位肝移植动物模型,模型的建立是本项研究的基础。 方法:采用“二袖套法”完成200例次大鼠原位肝移植模型,同时结合自己的体会,对“二袖套法”进行适当改进,包括套管的制作、受体的麻醉、腹主动脉的灌注以及肝上、肝下下腔静脉、门静脉等血管的吻合。 结果:肝上下腔静脉的吻合时间为10~15分钟,无肝期为12~18分钟,一周生存率可达75%以上。术后常见的并发症为出血、血栓形成、感染以及胆道梗阻。 结论:技术的改进增加了生存率,包括供肝腹主动脉灌注,在供肝的质量上明显优于单纯门静脉灌注。另外,减少供肝的机械性损伤、避免套管的扭曲、提高血管的吻合质量以及缩短无肝期,都是减少术后并发症和提高移植物存活的关键。 第二部分,目的:构建Ad-HO-1重组腺病毒载体,并鉴定其安全性及生物活性。 方法与结果:Ad-HO-1重组腺病毒载体的构建及鉴定用限制性内切酶XhoⅠ+HindⅢ从克隆载体PRH01中切出HO-1基因片段,亚克隆至经SalⅠ+HindⅢ酶切的克隆质粒Puc18中,形成转移质粒Puc18-PRHO1,将之用KpnⅠ+HindⅢ双酶切,再次亚克隆至经同样酶切的质粒pAdTrack-CMV中,形成转移质粒pAdTrack-Puc18-PRHO1,将之Pme Ⅰ酶切线性化后与腺病毒基因组质粒pAdEasy-1共转化大肠杆菌BJ5183,在BJ5183菌种中进行同源重组,得到腺病毒质粒pAdEasy-HO-1,经293细胞包装后,扩增、浓缩,最终获得高效、稳定、安全表达HO-1基因腺病毒Ad-HO-1。通过PCR、基因测序进行鉴定。 结论: 1.采用DNA重组技术,成功构建了重组腺病毒Ad-HO-1; 2.经PCR、荧光显微镜等检测表明:重组腺病毒Ad-HO-1能高效、稳定的表达HO-1目的基因和具有良好的安全性。 第三部分,目的:以近交系大鼠肝移植模型为基础,研究HO-1基因转染对移植肝的保护作用。 方法与结果:以近交系大鼠肝移植模型为基础,将重组HO-1/Ad感染移植肝,观察大鼠的生存情况、检测肝脏功能、观察HO-1在肝脏的表达及肝脏病理改变。发现肝外器官中没有转染的HO-1基因表达;HO-1在肝脏组织中的表达与G4组大鼠生存时间延长、肝功能变化、肝脏组织中淋巴细胞浸润时间滞后、数量减少及肝组织的破坏程度呈相关。 结论:HO-1对移植肝有保护作用,可延长其存活时间,具有潜在的临床应用价值。
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