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枯草杆菌224 yhdP、yugS、yhdT和yqhB基因敲除及对其溶血性的影响
中文名称: 枯草杆菌224 yhdP、yugS、yhdT和yqhB基因敲除及对其溶血性的影响
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论文编号: 3101437收藏本论文】【我的收藏】【我要投稿
英文名称: Knockout of yhdP、yugS、yhdT and yqhB Gene in Bacillus Subtilis 224 and Influence on Hemolysis
学位类型: 博士毕业论文
作者: 涉及隐私,隐去***  作者本人请参看权力声明>>
导师: 涉及隐私,隐去***
毕业学校: 涉及隐私,隐去***
专业: 预防兽医学
毕业年份: 涉及隐私,隐去***
关键字: 枯草芽孢杆菌224 同源重组 溶血 yhdP基因缺失 yugS基因缺失 yhdT基因缺失 yqhB基因缺失
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论文摘要: 枯草芽孢杆菌224(Bacillus subtilis 224,BS224)是从人体中分离出来的一种非致病菌.它不但是用途广泛的工程菌株,而且具有抗菌(略)能够用于烧、烫伤的治疗.根据微生态学原理,利用微生物间的拮抗作用,由枯草芽孢杆菌BS224活菌体制成的生物制品抑菌生和白天鹅气雾剂都具有改善创面微生态环境、抗菌消炎和促进创面愈合的作用.然而,由于存在溶血性(略)物在用于烧、烫(略)对创面造成了一定程度的损害.因此,大大限制了这两种药物的使用. 自从枯草芽孢杆菌168基因组全碱基测序完成以后,有8个可能与溶血有关的基因被发现,分别为yqhB(1329bp),yrkA(1305bp),yugS(1305bp),yhdT(1386bp),yhdP(1335bp),yqxC(810(略)lQ(642bp),ytjAα(228bp),其中前5个基因同源性很高,为69.83%,而),ytjAα为α溶血素样基因.溶血样基因的发现使得对枯草杆菌溶血性的研究(包括确定溶血基因和溶血发生的分子机理)成为可能. 本实验是根据枯(略)基因组的序列设计引物,以枯草杆菌224的...
Bacillus subtilis 224 was separated from human body and it was non-pathogenic. BS(omitted) only widely used (omitted)r strain, but also could diminish inflammation, resist germs and cureburn and scald wounds. On th(omitted)of the Microecology principle, Yi jun sheng and WhiteSwan aerosol made of live BS224 could impr(omitted)cology environment of wounds, resistgerms, diminish inflammation and impro(omitted)ealing by antagonistic action among microbe.But they impaired wounds in a way because of he...
目录:
中文摘要第12-14页
英文摘要第14-16页
1. 引言第17-35页
  ·枯草芽孢杆菌224第17-21页
    ·枯草芽孢杆菌224的一般生物学特性及其遗传背景第17页
    ·枯草芽孢杆菌224在医学上的主要应用第17-19页
    ·枯草芽孢杆菌224是分泌表达外源蛋白的理想宿主第19-21页
  ·多种菌株溶血基因及其溶血素的研究进展第21-28页
    ·大肠杆菌α溶血素第21-23页
    ·副溶血性弧菌溶血素第23-26页
    ·李斯特菌溶血素第26-28页
  ·基因打靶技术第28-34页
    ·基因打靶技术的原理第28-29页
    ·基因打靶的策略第29-30页
    ·基因打靶载体的构建第30-31页
    ·影响基因打靶的因素第31-32页
    ·基因打靶的应用第32-34页
  ·研究的目的与意义第34-35页
2. 材料第35-37页
  ·实验材料第35页
  ·载体第35页
  ·酶与生化试剂第35页
  ·主要仪器和设备第35-37页
3. 方法第37-51页
  ·载体pMD18-T-neo的构建第37-40页
    ·质粒pEGFP-N1的提取第37页
    ·新霉素抗性基因的扩增第37-38页
    ·PCR产物的纯化第38页
    ·PCR纯化产物与克隆载体的连接第38页
    ·大肠杆菌JM109感受态细胞的制备第38-39页
    ·重组克隆载体的转化第39页
    ·阳性克隆的筛选与鉴定第39页
    ·新霉素抗性基因的序列测定与结果分析第39-40页
  ·yhdP基因的克隆、测序及敲除研究第40-44页
    ·枯草芽孢杆菌224染色体DNA的提取第40页
    ·yhdP基因的克隆第40-41页
    ·yhdP基因打靶载体的构建第41-43页
    ·枯草杆菌224感受态的制备第43页
    ·电转化第43-44页
    ·yhdP基因基因缺失菌株的筛选及PCR检测第44页
    ·yhdP基因基因缺失菌株的溶血性检测第44页
  ·yugS基因的克隆、测序及敲除研究第44-47页
    ·yugS基因的克隆第44-45页
    ·yugS基因打靶载体的构建第45-46页
    ·电转化第46-47页
    ·yugS基因基因缺失菌株的筛选及PCR检测第47页
    ·yugS基因基因缺失菌株的溶血性检测第47页
  ·yhdT基因的克隆、测序及敲除研究第47-49页
    ·yhdT基因的克隆第47页
    ·yhdT基因打靶载体的构建第47-48页
    ·电转化第48页
    ·yhdT基因基因缺失菌株的筛选及PCR检测第48-49页
    ·yhdT基因基因缺失菌株的溶血性检测第49页
  ·yqhB基因的克隆、测序及敲除研究第49-51页
    ·yqhB基因的克隆第49页
    ·yqhB基因打靶载体的构建第49-50页
    ·电转化第50页
    ·yqhB基因基因缺失菌株的筛选及PCR检测第50页
    ·yqhB基因基因缺失菌株的溶血性检测第50-51页
4. 实验结果第51-72页
  ·载体pMD18-T-neo的构建第51-52页
    ·新霉素抗性基因的扩增第51页
    ·重组克隆质粒pMD18-T-neo的鉴定第51页
    ·新霉素抗性基因序列测定与结果分析第51-52页
  ·yhdP基因的克隆、测序及敲除研究第52-57页
    ·枯草芽孢杆菌224染色体DNA的提取第52-53页
    ·yhdP基因的克隆第53页
    ·yhdP基因同源臂的克隆第53-55页
    ·yhdP基因打靶载体的构建第55页
    ·yhdP基因缺失菌株的筛选及PCR检测第55-56页
    ·yhdP基因缺失菌株的核苷酸验证第56页
    ·yhdP基因缺失菌株的溶血性检测第56-57页
  ·yugS基因的克隆、测序及敲除研究第57-62页
    ·yugS基因的克隆第57-58页
    ·yugS基因同源臂的克隆第58页
    ·yugS基因打靶载体的构建第58-60页
    ·yugS基因缺失菌株的筛选及PCR检测第60-61页
    ·yugS基因缺失的核苷酸序列验证第61页
    ·yugS基因缺失菌株的溶血性检测第61-62页
  ·yhdT基因的克隆、测序及敲除研究第62-67页
    ·yhdT基因的克隆第62页
    ·yhdT基因同源臂的克隆第62-63页
    ·yhdT基因打靶载体的构建第63-65页
    ·yhdT基因缺失菌株的筛选及PCR检测第65页
    ·yhdT基因缺失的核苷酸序列验证第65-66页
    ·yhdT基因缺失菌株的溶血性检测第66-67页
  ·yqhB基因的克隆、测序及敲除研究第67-72页
    ·yqhB基因的克隆第67页
    ·yqhB基因同源臂的克隆第67-69页
    ·yqhB基因打靶载体的构建第69页
    ·yqhB基因缺失菌株的筛选及PCR检测第69-70页
    ·yqhB基因缺失的核苷酸序列验证第70页
    ·yqhB基因缺失菌株的溶血性检测第70-72页
5. 讨论第72-77页
  ·枯草芽孢杆菌224染色体DNA的提取第72页
  ·基因打靶载体的构建第72-74页
    ·打靶载体的骨架质粒pMD18-T-neo的构建第72-73页
    ·靶基因同源臂的克隆第73-74页
    ·同源臂连入打靶载体第74页
  ·外源DNA导入宿主细胞方式的选择第74-75页
  ·阳性重组子的筛选与鉴定第75-76页
  ·四个基因yhdP、yugS、yhdT、yqhB与溶血性的关系第76-77页
6. 结论第77-78页
致谢第78-79页
参考文献第79-89页
附录A第89-90页
附录B第90-91页
附录C第91-92页
附录D第92-93页
附录E第93-94页
附录F第94-95页
附录G第95-96页
附录H第96-97页
附录I第97-98页
附录J第98-100页
攻读学位期间发表的学术论文第100页
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