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RTN3/HAP与几种蛋白的相互作用及其功能研究
中文名称: RTN3/HAP与几种蛋白的相互作用及其功能研究
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论文编号: 3101411收藏本论文】【我的收藏】【我要投稿
英文名称: The Interaction between RTN3/HAP and Related Proteins and Their Intracellular Function
学位类型: 博士毕业论文
作者: 涉及隐私,隐去***  作者本人请参看权力声明>>
导师: 涉及隐私,隐去***
毕业学校: 涉及隐私,隐去***
专业: 微生物学
毕业年份: 涉及隐私,隐去***
关键字: RTN3 FADD Bcl-2 CRELD1 ER 细胞凋亡 细胞增殖
简介目录: 点击此处 免费索取本论文简介和目录>>
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论文摘要: asy是本实验室发现的一个内质网定位的凋亡诱发基因,hap(homologue of ASY protein)是(略)NA文库中克隆的ASY结合蛋白基因(Li et al,2001;Qi et al,2003),当时称这一基因为asyip( ASY interacting protein).序列分析表明HAP和ASY都属于RTN家族,HAP为RTN3(略)TN4B,也称为NogoB.多年以来,本室已对hap基因的转录调控,HAP蛋白的结构、同源(略)、凋亡诱发功能和内质网应激等进行了大量的研究,为了进一步研究RTN3/HAP参与的细胞凋亡信号转导途径及网络调控,本论文着重分析了RTN3与几种蛋白的相互作用及其功能,阐述了RTN3参与(略)号转导途径和各个途径之间的交叉,也初步论述了RTN3与一个AVSD( Atrioventricular septal defects)风险致病基因产物的作用及对细胞的增殖和凋亡的影响,初步揭示了RTN3与AVSD之间的分子机制. 本室的刘青珍(略)双杂交系统筛选出果蝇的FADD(dFADD)能与人的RTN3(hRTN3)相互作用...
hap, a gene encoding an ASY(NogoB) interacting pro(omitted)identified by cloning complementary DNA from human lung cell line (WI238) cDNA librar(omitted)ast two hybrid system. Sequence analysis showed that both HAP and ASY belo(omitted)family. HAP is RTN3, while ASY is RTN4B/NogoB. Last ten years, our lab has focused on the structure, dimerization, apoptotic function of H(omitted)ot of reports on HAP have been published. Bas(omitted)ious results, we studied the interactions of RTN3/HAP and relate...
目录:
中文摘要第4-7页
ABSTRACT第7-9页
第1章 相关研究进展第15-85页
  ·细胞凋亡(CELL APOPTOSIS)第15-59页
    ·细胞凋亡概述第15-30页
    ·细胞凋亡的病理学意义第30-31页
    ·细胞凋亡信号转导途径第31-55页
    ·细胞凋亡的网络调控第55-59页
  ·AVSD 疾病与 CRELD1 基因第59-61页
    ·AVSD 的分子遗传学概述第59-60页
    ·AVSD 的致病风险基因第60页
    ·AVSD 的发病候选基因第60页
    ·AVSD 的其他相关基因第60-61页
  ·RETICULON(RTN)家族第61-70页
    ·RTN 基因家族的发现及其主要成员第62-64页
    ·RTN 的细胞定位和拓扑构象第64-65页
    ·RTN 家族成员的相互作用蛋白第65-67页
    ·RTN 的功能第67-70页
  ·本研究的背景第70-85页
    ·本研究室有关RTN3/HAP 的重要研究成果第70-84页
    ·本研究的目的和意义第84-85页
第2章 基本实验技术与方法第85-99页
  ·质粒 DNA 的制备和纯化第85-86页
    ·质粒 DNA 的小量制备第85页
    ·质粒DNA 的大量制备第85-86页
    ·质粒DNA 的纯化第86页
  ·限制性酶消化第86-87页
  ·DNA 片段回收第87-88页
    ·低熔点琼脂糖凝胶法第87页
    ·玻璃奶(Glass-milk)法第87-88页
  ·DNA 片段和载体的连接第88页
  ·感受态细胞的制备第88-89页
    ·冷氯化钙法制备新鲜感受态细胞第88页
    ·电转化感受态细胞的制备第88-89页
  ·质粒DNA 的转化第89-90页
    ·常规转化法第89页
    ·质粒的快速转化法第89页
    ·质粒的电转化法第89-90页
  ·菌种的保存第90页
  ·菌落PCR第90页
  ·PCR 定点诱变(根据 STRATAGENE 的 QUICKCHANGE SITE-DIRECTED MUTAGENESIS KIT 说明,略有改动)第90-91页
  ·细胞培养基的配制(以RPMI 1640 为例)第91页
  ·细胞传代培养第91-92页
  ·细胞的冻存与复苏第92-93页
    ·冻存第92页
    ·复苏第92-93页
  ·细胞转染第93-94页
    ·脂质体转染第93页
    ·电转染法第93-94页
  ·用原核表达系统表达蛋白第94-95页
  ·NI~(++) 亲和层析法纯化蛋白质第95页
  ·抗体的制备第95-96页
  ·GST 树脂 PULL-DOWN 分析第96-97页
  ·免疫共沉淀第97-98页
  ·WESTERN BLOT第98-99页
第3章 RTN3 与FADD 的相互作用及其细胞凋亡信号转导途径第99-119页
  ·引言第100-103页
  ·材料与方法第103-104页
    ·质粒、细胞与试剂第103页
    ·细胞培养和转染(见第2章)第103页
    ·免疫共沉淀第103-104页
    ·流式细胞术检测细胞凋亡第104页
    ·激光共聚焦第104页
  ·结果第104-116页
    ·过表达的 RTN3 与过表达的 FADD 在体内的相互作用第104-106页
    ·过表达的 RTN3 与内源性 FADD 在细胞内的相互作用第106-107页
    ·FADD 与RTN3 相互作用功能区的鉴定第107-108页
    ·RTN3 的C-端45 个氨基酸是与 FADD 结合的功能区第108页
    ·过表达的 RTN3 能招募内源性的 FADD 到内质网上形成复合物第108-110页
    ·过表达的RTN3 发动了FADD 依赖型的caspase-8 下游级联事件第110-112页
    ·过表达 RTN3 诱发的caspase-9 下游级联事件是部分 FADD 依赖性的第112页
    ·过表达 NogoB 也能以 RTN3 类似方式与 FADD 作用第112-114页
    ·衣霉素刺激下内源性 RTN3 与 FADD 的相互作用及定位第114-115页
    ·FADD 与RTN3 的作用能影响TM 诱发的细胞凋亡和caspase8 活化第115-116页
  ·讨论第116-119页
第4章 RTN3 与BCL-2 的相互作用以及对细胞凋亡的调控第119-131页
  ·前言第119-121页
  ·材料与方法第121-123页
    ·细胞、质粒与试剂第121页
    ·细胞培养和转染(见第2章)第121页
    ·稳定表达细胞系的构建第121页
    ·亚细胞组分的制备第121-122页
    ·免疫共沉淀第122页
    ·Pull-Down 实验第122-123页
    ·流式细胞术技术第123页
    ·激光共聚焦第123页
  ·结果第123-128页
    ·RTN3 与Bcl-2 在体外的相互结合第123-124页
    ·过表达的 RTN3 与内源性的 Bcl-2 能在细胞内质网上相互结合..第124-125页
    ·外源性 Bcl-2 和 RTN3 表达的消长对细胞凋亡的调控第125-126页
    ·外源刺激对 RTN3 表达的上调促进了 Bcl-2 的富聚与凋亡抑制功能第126-128页
  ·讨论第128-131页
第5章 RTN3 与一种心脏病致病风险基因产物的结合及其对细胞生理的影响第131-147页
  ·前言第131-133页
  ·材料与方法第133-136页
    ·质粒与试剂第133页
    ·Pull-down 实验第133-134页
    ·流式细胞技术第134-135页
    ·MTT 法检测细胞生长第135页
    ·细胞培养和转染(见第2章)第135页
    ·稳定表达细胞系的构建第135页
    ·免疫共沉淀和免疫印迹第135-136页
    ·激光共聚焦第136页
    ·亚细胞组分的制备第136页
  ·结果第136-144页
    ·RTN3 与 CRELD1 的体外相互作用第136-138页
    ·过表达的CRELD1 与过表达或内源的RTN3 的体内相互作用第138-139页
    ·过表达的 CRELD1 招募内源的 RTN3 到细胞质膜上第139-140页
    ·过表达的 CRELD1 与 RTN3 对细胞生长/死亡的影响第140-141页
    ·过表达 CRELD1 对过表达 RTN3 诱发的细胞凋亡的影响第141-144页
  ·讨论第144-147页
第6章 超表达 RTN3 对细胞凋亡三条经典信号途径的网络调控第147-151页
  ·前言第147-148页
  ·RTN3 对外界刺激应激的超表达,诱导内质网依赖的细胞凋亡第148-149页
  ·RTN3 诱导的内质网凋亡途径与线粒体途径的CROSS TALKING第149页
  ·RTN3 诱导的内质网凋亡途径与死亡受体途径的CROSS TALKING第149-150页
  ·RTN3 与BCL2 结合抑制了其凋亡诱发活性第150-151页
研究总结和创新点第151-152页
参考文献第152-176页
攻读博士学位期间发表和待发表的论文第176-177页
致谢第177-178页
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