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补益营卫延缓皮肤衰老的理论和实验研究
中文名称: 补益营卫延缓皮肤衰老的理论和实验研究
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论文编号: 3101299收藏本论文】【我的收藏】【我要投稿
英文名称: 无英文名称
学位类型: 博士毕业论文
作者: 涉及隐私,隐去***  作者本人请参看权力声明>>
导师: 涉及隐私,隐去***
毕业学校: 涉及隐私,隐去***
专业: 中医临床基础
毕业年份: 涉及隐私,隐去***
关键字: 皮肤衰老 脾胃 营卫 抗氧化 免疫组织化学 细胞因子 中医药疗法
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论文简介:皮肤衰老是人体最常见的衰老现象。一般分为时序衰老和光老化。时序衰老多表现为细小皱纹、皮肤松弛、干燥和粗糙。光老化多表现为弹性丧失、皱纹粗深、皮革样外观、常伴有色素沉着。中医药在延缓皮肤衰老中有明显的优势。中医理论认为皮肤衰老与脾胃、营卫关系密切。本文从文献研究方面探讨皮肤衰老、脾胃与营卫之间的关系,为健脾胃、补营卫延缓皮肤衰老提供理论依据;实验研究以具有健脾胃、补营卫作用的药物组方,探讨其延缓皮肤衰老的现代医学机制,为健脾胃以补益营卫延缓皮肤衰老提供实验依据。 1 文献研究 本部分主要回顾了中医皮肤衰老理论的发展源流、脾胃在衰老与皮肤衰老中的作用、营卫与衰老和皮肤衰老的关系。 中医皮肤衰老理论是与中医衰老理论的发展一脉相承,萌芽于春秋之前,形成于汉唐,充实于宋元明清,发展于当代。 张仲景《伤寒杂病论》益营卫重视脾胃,并且《伤寒论》中明确论述了营卫与皮肤衰老之间的关系。 脾胃,主运化腐熟水谷精微和运行水液,为气血生化之源、后天之本。脾胃居于中焦,为气机升降的枢纽,气的升降出入均赖脾胃的功能正常。脾胃常受到饮食规律、个人口味、生活方式和情志的影响而容易出现功能失常,导致气血生化不足,营卫乏源,诱导皮肤衰老的进展。脾胃功能的失常,又容易导致瘀血、痰浊等病理产物的累积,从而加重皮肤衰老。 营卫化源于中焦,布达于皮肤,具有营养、保护皮肤,司皮肤感觉,调节汗液排泄的作用,与皮肤的生理病理有十分密切的关系。通常情况下,营行脉中,卫行脉外,两者常常通过经络腧穴、络脉、玄府和腠理相互交汇,达到阴平阳秘的稳态。营卫运行还具有节律性。营卫失常是皮肤衰老的基本病理因素。 2 实验研究 2.1 目的通过观察补益营卫的抗氧化作用和对衰老皮肤胶原的影响,探讨补益营卫延缓皮肤衰老的深层次机制。 2.2 方法 120只小鼠随机分为六组,一组设为正常组,常规摄食、光照。其它五组利用D-半乳糖120mg/1(g·d<'-1>皮下注射制造小鼠皮肤衰老模型。其中一组为模型组,每日皮下注射生理盐水,常规摄食、光照;一组设为对照组,维生素E50mg/kg·d<'-1>每日灌胃;其它三组以8g/kg·d<'-1>、4g/kg·d<'-1>、2g/kg·d<'-1>剂量给与补益营卫煎剂,连续六周。最后腹主动脉取血,分离血清,利用试剂盒测定超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量、透明质酸含量;沉淀红细胞,洗涤,利用试剂盒测定Na<'+>,K<'+>-ATP酶活力。取背部脱毛皮肤,制作10%匀浆,利用试剂盒测定SOD活性、MDA含量和蛋白浓度;称取适量脱毛皮肤,利用试剂盒测定羟脯氨酸含量。取颈部皮肤4%多聚甲醛固定、石蜡包埋、HE染色,光镜下观察组织病理学改变。另外,5μm切片,利用免疫组织化学方法和图像分析系统评价转化生长因子β1(TGF-β1)、结缔组织生长因子(CTGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、基质金属蛋白酶(MMP)MMP-1和MMP-9、基质金属蛋白酶抑制物(TIMPs)TIMP-1和2、组织性纤溶酶原激活物(t-PA)和组织性纤溶酶原激活物抑制物-1(PAI-1)在衰老皮肤的表达。 2.3 结果 小鼠皮下注射D-半乳糖(120mg/kg·d<'-1>)六周后,模型组血清中MDA含量显著增加,SOD活力降低,与各组相比有显著统计学意义。给与补益营卫后可降低血清中的脂质过氧化产物MDA,高剂量组优于阳性对照组(P<0.05)、低剂量组(P<0.001)及正常组(P<0.05);补益营卫可提高血中SOD活力,中、低剂量组SOD活力与正常组相当,与模型组比较有显著性差异(P<0.05);高剂量组SOD活力优于阳性组(P<0.05)。 造模后,模型组皮肤中MDA含量显著增加,明显高于其它组别:SOD活力降低。灌服补益营卫后可降低自由基代谢产物MDA含量,高剂量组优于阳性对照组(P<0.05)、低剂量组(P<0.05)及正常组(P<0.01);补益营卫可提高皮肤中SOD活力,中、低剂量组SOD活力与正常组相当,与模型组比较有显著性差异(P<0.05),高剂量组SOD活力优于阳性组(P<0.05),且SOD活力高于正常组。 造模后,小鼠皮肤蛋白降低,与其它各组相比有显著统计学意义(P<0.05、P<0.01或P<0.001)。补益营卫后,高、中及低剂量组蛋白含量增加明显,均高于正常组,其中高剂量组与对照组和低剂量组比较统计学意义显著(P<0.05)。小鼠皮下注射D-半乳糖后,皮肤羟脯氨酸含量下降,与各组相比有显著性差异(P<0.05或P<0.001)。补益营卫后,可显著提高皮肤羟脯氨酸水平,低剂量组羟脯氨酸水平与正常组相当,高、中剂量组羟脯氨酸水平与正常组相比P<0.00l,高、中剂量组羟脯氨酸水平均优于阳性对照组(P<0.001和P<0.05),高剂量组羟脯氨酸水平优于低剂量组(P<0.05)。 造模后,红细胞Na<'+>,K<'+>-ATP酶活力下降,与各组相比有显著性差异(P<0.05或P<0.001)。补益营卫后,可显著提高红细胞Na<'+>,K<'+>-ATP酶水平,中、低剂量组红细胞Na<'+>,K<'+>-ATP 酶水平与正常组相当,高剂量组红细胞Na<'+>,K<'+>-ATP酶水平与正常组相比P<0.00l,高剂量组红细胞Na<'+>,K<'+>-ATP酶水平优于阳性对照组(P<0.05)和低剂量组(P<0.001)。血清透明质酸含量经方差分析,各组方差不齐,用秩和检验,各组秩次间无统计学意义(P>0.05)。 与正常组小鼠皮肤相比,模型组小鼠皮肤结构可辨,表皮与真皮界线尚可分,表皮欠规则;真皮显著变薄,染色较深,细胞层数减少;皮下脂肪丰富;毛囊、皮脂腺欠完整。给与补益营卫及维生素E后,小鼠皮肤结构完整,表皮与真皮界线清晰,表皮规则,真皮层较厚,染色较正常组均匀致密,细胞层数增多;基底膜可见,皮下脂肪少。 造模后bFGF表达水平显著降低,与正常组相比有统计学意义(p<0.05)。补益营卫后,高剂量组bFGF水平显著增加,与正常组,模型组、VE组、低剂量组相比均有显著性差异,分别为p<0.05,p<0.001,p<0.05和,p<0.05。中、低剂量组、VE组均使下降的bFGF基本回升至正常水平,高剂量组蛋白表达含量与阳性相比增加,有统计学差异(p<0.05)。造模后TGF-β1表达水平显著降低,与正常组相比有统计学意义(P<0.05);补益营卫高、中、低三个剂量组均可显著增加TGF-β1水平,与模型组相比有显著性差异,其中高与中、低剂量组之间有显著性差异。VE可使降低的TGF-β1升高,与模型组相比有统计学意义(P<0.05)。造模后CTGF表达水平显著增强,与正常组、补益营卫处理组相比有统计学意义(p<0.05);经补益营卫处理后,CTGF水平与正常组水平相当,高、中、低三个剂量组之间没有明显差异(p>0.05)。给与VE后,CTGF的表达在毛囊等处显著增加,与各组相比均有显著性差异。 造模后MMP-1表达水平明显增加,与正常组相比有显著统计学意义(p<0.05);给与补益营卫后高、中、低三个剂量组后MMP-1水平略有升高,但与模型组相比没有统计学差异(p>0.05),三个剂量组之间也没有明显差异(p>0.05)。给与VE后增加的MMP-1降低,与模型组相比有统计学意义(P<0.05),并且与补益营卫三个剂量相比,其活性水平较低,与补益营卫高剂量组相比有显著统计学差异(P<0.01)。造模后MMP-9表达水平显著降低,与正常组相比有显著统计学差异(P<0.05);补益营卫后,MMP-9表达水平明显升高,与模型组相比有显著统计学意义(P<0.05或P<0.01)。补益营卫高、中、低三个剂量组之间没有明显差异(p>0.05)。给与VE后,MMP-9表达明显增加,与模型组相比有显著性统计学差异(P<0.05)。 造模后TIMP-1表达水平明显降低,与各组相比有显著统计学意义(p<0.01);补益营卫高、中、低三个剂量组均增加TIMP-1水平,与模型组相比有显著性差异,但是三个剂量组之间没有明显差异(p>0.05)。vE可使增加的FIMP-1降低,与模型组相比有统计学意义(P<0.01)。造模后TIMP-2表达水平增加,与各组相比有显著统计学意义(P<0.05);补益营卫后,TIMP-2水平降低至与正常组水平相当,高、中、低三个剂量组之间没有明显差异(p>0.05)。给与VE后,TIMP-2的表达显著降低。 造模后tPA表达水平明显增加,与各组相比有显著统计学意义(p<0.01);补益营卫高、中、低三个剂量组均降低tPA水平,与模型组相比有显著性差异,但是三个剂量组之间没有明显差异(p>0.05)。VE可使增加的tPA降低,与模型组相比有统计学意义(P<0.01)。造模后PAI-1表达水平变化不大,与正常组、补益营卫组相比无统计学意义(p>0.05);补益营卫后,PAl-1水平与正常组水平相当,高、中、低三个剂量组之间没有明显差异(p>0.05)。给与VE后,PAI-1的表达在毛囊等处显著增加,与各组相比均有显著性统计学差异。 2.4 结论 补益营卫具有抗氧化、增加皮肤蛋白合成及胶原含量的作用,能够延缓皮肤衰老。
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