免费论文
收费论文
发表论文
我要投稿
设为首页 招标网
联系我们
经济学|管理学|法学|计算机|医学|教育|文学|政治|艺术|哲学|更多 经济学|管理学|法律|计算机|医学|教育|文学|政治|艺术|哲学|更多
 论文搜索
  推荐服务: 论文发表 收费论文
期刊论文格式
毕业论文格式
期刊论文范文
毕业论文范文
论文致谢
毕业论文答辩
开题报告
论文选题
英文摘要书写
EGF、TGFα、EGFR在绵羊早期胚胎中的表达和作用研究
中文名称: EGF、TGFα、EGFR在绵羊早期胚胎中的表达和作用研究
全文提供: 购买充值卡,就可下载本篇论文全文  
论文编号: 3100931收藏本论文】【我的收藏】【我要投稿
英文名称: The Expression and Function of EGF, TGFα and EGFR in Ovine Preimplantation Embryos Development
学位类型: 博士毕业论文
作者: 涉及隐私,隐去***  作者本人请参看权力声明>>
导师: 涉及隐私,隐去***
毕业学校: 涉及隐私,隐去***
专业: 动物学
毕业年份: 涉及隐私,隐去***
关键字: 表皮生长因子 转化生长因子 胚胎发育 免疫组织化学 RNA干涉 胚胎细胞
简介目录: 点击此处 免费索取本论文简介和目录>>
全文提供: 购买充值卡,就可下载本篇论文全文  

       论文发表:快速、低价、包过!发表论文就找论文天下

论文简介:本研究主要通过免疫组织化学和RT-PCR的方法检测了EGF、TGFα及其受体EGFR在绵羊卵母细胞、早期胚胎和雌性生殖道中的表达情况;在成熟培养液和发育培养液中添加不同剂量的EGF、TGFα,观察其对卵母细胞和胚胎发育的影响;采用RNAi的方法进一步探讨了TGFα及其受体在绵羊早期胚胎发育中的作用。 一、RT-PCR方法检测EGF、TGFα和EGFR在卵母细胞、早期胚胎和生殖系统中的表达 1.EGF、TGFα和EGFR mRNA在卯母细胞、早期胚胎中的表达 通过RT-PCR的方法检测了EGF、TGFα和EGFR mRNA在卵母细胞、早期胚胎中的表达情况。结果显示在卵母细胞和早期胚胎中均未检测到EGFmRNA的表达。在未成熟的卵母细胞、成熟的卵母细胞和早期胚胎中均有TGFα和EGFR mRNA的表达,成熟卵母细胞中的表达量明显高于未成熟卵母细胞中的表达量。实验结果表明卵母细胞在成熟过程中丰富地储存了这两种生长因子的mRNA,随着胚胎的发育储存的mRNA迅速减少。TGFα mRNA的量在8 细胞期下降到最低水平,并随着胚胎基因组的激活胚胎开始转录TGFα,使TGFα mRNA表达总量保持在一定水平,持续到桑椹胚期;EGFR mRNA的量在胚胎发育到桑椹胚期下降到最低,而囊胚期胚胎中的整体表达量又上升。 2.EGF、TGFα和EGFR mRNA在生殖系统中的表达 通过RT-PCR的方法检测了EGF、TGFct和EGFR mRNA在生殖系统中的表达。结果表明在卵巢细胞和排卵后的输卵管上皮、子宫上皮和胎盘小叶细胞中均没有检测到EGF mRNA。EGFR mRNA在排卵后7-8天的子宫上皮细胞和胎盘小叶中表达水平相对较高,而在卵巢细胞和排卵后输卵管中的转录水平较低;TGFα mRNA在输卵管中的表达水平明显高于子宫上皮和胎盘小叶。输卵管中TGFα维持在较高水平可能有利于早期胚胎的发育,EGFR在子宫和胎盘小叶中的高表达可能有利于上皮细胞的进一步增殖分化,为胚胎的着床和胎儿妊娠提供合适的环境。 二、免疫组织化学的方法检测TGFα和EGFR在卵母细胞、早期胚胎和生殖系统中的表达 1.TGFα和EGFR蛋白在卵母细胞、早期胚胎中的表达 通过免疫组织化学的方法研究了TGFα和EGFR蛋白在卵母细胞、早期胚胎中的表达情况。EGFR和TGFα在未成熟卵母细胞、卵丘细胞和成熟卵母细胞的细胞膜区域均有表达,TGFα在受精卵中的表达量明显增加。EGFR、TGFα从2细胞到囊胚期的胚胎中均有表达,到了扩张囊胚期EGFR主要分布在滋养外胚层细胞,而在内细胞团中表达量相对较低。TGFα主要存在于接近细胞膜的膜下区域,在囊胚中,内细胞团和滋胚层细胞中均丰富地表达。体内胚胎与体外胚胎表达情况基本一致。 2.EGFR蛋白的表达形式 通过蛋白印迹的方法表明:在卵母细胞和早期胚胎中存在两种不同构型的EGFR,即野生型(170KE))和突变型Ⅷ(145KD)。未成熟和成熟的卵母细胞中主要存在Ⅷ突变型,而野生型表达相对较少,成熟后卵母细胞中的Ⅷ突变型蛋白明显增加。在第二天、第四天的胚胎中野生型和突变体形式受体的表达量均明显增加。 3.TGFα和EGFR蛋白在生殖系统中的表达 免疫组织化学的结果表明,TGFa在生长卵泡的颗粒细胞和排卵后0,2-3,4-5,6-7天的输卵管管腔、6-7天的子宫上皮和子宫腺中均有较强的表达。然而在退化卵泡中没有表达。EGFR仅在卵泡的颗粒细胞和排卵后6-7天的子宫上皮中才有表达,但在排卵后0-7天的输卵管中均没有表达。在子宫腺和生长卵泡的壁层颗粒细胞中有较弱的表达。 三、EGF和TGFα对卵母细胞成熟的影响 未成熟卵母细胞分别在TCM199基础培养液+血清、TCM199基础培养液+BSA+EGF、TCM199基础培养液+BSA+TGFα和TCM199基础培养液+BSA四组成熟培养系统中成熟培养,22小时后上述各组卵母细胞的核成熟率分别为75.2%、73.1%、69.8%、63.5%,处于第一次减数分裂末期的比率分别为16.3%、15.9%、16.9%、27.0%,在添加血清、EGF、TGFα各组中核成熟率显著高于其它各组(P<0.05),处于末期的比例明显低于其它各组(P<0.05);添加血清、EGF、TGFα各组在a-Tubulin蛋白的分布与表达上(66.6%、66.6%、73.6%)明显高于BSA组的正常率43.3%(P<0.05);各组CG发生迁移较好的卵母细胞的比率分别为58.8%、33.9%、54.7%、47.9%,血清组和添加EGF组CG迁移至皮质区的比例明显高于仅添加BSA处理组(P<0.05)。结果表明TGFα和EGF促进了绵羊卵母细胞成熟过程中从第一减数分裂末期向第二减数分裂中期的转变,同时改善了α-Tubulin蛋白在卵母细胞中的正常表达与分布;EGF和血清均明显促进了绵羊卵母细胞CG的正常迁移;因此TGFα和EGF能够替代血清中的某些成分促进和改善体外成熟卵母细胞核成熟的质量,EGF比TGFα更能促进绵羊卵母细胞胞质的成熟。 四、EGF和TGFα对胚胎发育的影响 1.添加EGF和TGFα对胚胎发育的影响 在化学成分明确的培养系统中添加不同剂量的EGF和TGFα对早期胚胎进行发育培养,结果表明,添加5ng/ml的TGFα、25ng/ml的EGF、5ng/mlTGFα+25ng/mlEGF和对照组的8细胞率和囊胚发育率分别为88.0%、75.8%、76.8%、77.8%和26.7%、19.2%、23.5%、18.6%,TGFα组8细胞期胚胎的发育率高于其他各组(P<0.05);囊胚率在各组之间无显著差异(P>0.05);各组囊胚期胚胎中平均数细胞分别为73、74、70、74,TGFα和EGF的添加对囊胚期胚胎细胞的总数均没有明显的影响;死亡细胞数分别为4.3%,18.5%,10.4%和23%,仅添加TGFα组与对照组和EGF组均有极显著的差异(P<0.01),与TGFα+EGF组之间有显著差异(P<0.05)。结果表明TGFα明显促进了囊胚期细胞的存活,改善了早期胚胎细胞的发育命运。 2.EGFRdsRNA、TGFα dsRNA注射对早期胚胎发育的影响 2.1 EGFRdsRNA、TGFα dsRNA注射对目的基因表达和部分基因表达的影晌 未成熟卵母细胞中分别注射EGFR dsRNA、TGFα dsRNA和水,同时设立对照组(不注射组),结果表明EGFRdsRNA、TGFα dsRNA的注射与注水和对照组相比明显降低了EGFR、TGFα 目的:mRNA的含量,注水和对照组之间基本一致。分别交叉检测EGFR和TGFα mRNA,TGFα dsRNA的注射使EGFR mRNA的表达总量明显下降,EGFRdsRNA注射后,TGFα mRNA在各组间基本一致;蛋白印记表明,TGFa dsRNA的注射使EGFR两种形式的蛋白表达量升高。免疫组织化学染色结果显示,dsRNA注射组与注水组和对照组相比,分别降低了EGFR和TGFα在胚胎中的表达量。成熟过程中表达量明显升高的基因β-actin、间隙连接蛋白(CX-43、CX-45)基因的mRNA与对照组相比均没有明显的变化。 2.2 TGFα dsRNA注射对早期胚胎发育的影晌 注射dsRNA的卵母细胞经成熟培养,体外受精后的胚胎体外发育结果如下:注射TGFα dsRNA组、注射TGFα dsRNA后培养液中加入10ng/ml TGFα组、注水组和对照组的卵裂率和囊胚率分别为48.1%、56.3%、56.4%、73.8%和12.9%、18.9%、16.1%、32.2%,注射TGFα dsRNA与注水组卵母细胞来源的胚胎之间在卵裂率和囊胚率方面没有显著的差异(p>0.05),与对照组之间均有显著差异(P<0.05),加入TGFα后卵裂率和囊胚率均比不添加组有一定提高。 对照组和注水组的囊胚在内细胞团中仅存在少量的细胞凋亡现象,滋养外胚层也仅有个别的细胞发生了凋亡,而注射TGFα dsRNA后囊胚中滋养外胚层和内细胞团细胞的凋亡数量明显上升;注射TGFα dsRNA胚胎培养在添加10ng/ml TGFα的培养液中形成的囊胚,其滋养外胚层中凋亡的细胞明显低于添加TGFα培养组,内细胞团细胞并未见有明显的变化。结果表明TGFα表达量的下降没有影响胚胎的发育率,但增加了囊胚中细胞的凋亡,TGFα的加入能改善因内源TGFα减少而引起的滋养外胚层细胞的凋亡。 2.3 EGFR dsRNA注射对早期胚胎发育的影响 卵母细胞经过注射dsRNA后,注射EGFR dsRNA组、注水组和对照组卵母细胞的卵裂率、囊胚率和孵化率分别为:55.8%、69.7%、70.0%;18.1%、22.7%、30.7%和18.2%、33.7%、34.1%,注水组与对照组之间在这三个方面均没有显著的差异(P>0.05)。注射EGFR dsRNA组与对照组和注水组之间相比较,卵裂率、囊胚率和孵化率在统计学上均有显著的差异(p<0.05);囊胚中细胞总数分别为80、90、94,内细胞团细胞数分别为22、24、23,滋养外胚层细胞数分别为58、66和71,在统计学上均没有明显的差异(p>0.05)。结果表明EGFR介导的信号途径对受精卵的卵裂、囊胚的形成和孵化均有促进作用。
本类相关论文:
·前列腺素转运蛋白及代谢酶在小鼠早期妊娠子宫中的
·不同种群卤虫卵耐热性比较及其内在机制的探讨
·Fgf17b及其负反馈因子Mkp3在斑马鱼胚胎
·胰岛素样生长因子及其受体在绵羊早期胚胎及生殖系
·IGFBP-3在斑马鱼胚胎发育中的功能
表皮生长因子论文 转化生长因子论文
·芍药八味汤对慢性萎缩性胃炎大鼠EGF和VEGF
·胶原蛋白海绵联合表皮细胞生长因子修复兔跟腱外露
·白及胶对宫颈炎模型大鼠EGF、EGFR及TNF
·济宁青山羊毛囊发育特性与EGF、IGF2基因差
·表皮生长因子受体在垂体腺瘤中的表达和临床意义
·TGF-β3通过SF-1介导促进小鼠颗粒细胞中
·姜黄素治疗实验性肝纤维化大鼠及其作用机制研究
·骨形态发生蛋白-7及丹参素抑制肝纤维化的机制研
·川芎嗪通过p38MAPK途径对TGF-β_1诱
·肾康降酸颗粒对尿酸性肾病大鼠TNF-α、IL-
胚胎发育论文 免疫组织化学论文
·小鼠RESP18的克隆与功能研究
·金鱼Striatin基因对金鱼胚胎发育的调控功
·广玉兰生殖生物学研究
·HIRA敲降对银鲫胚胎发育的影响
·AtPPR2基因在拟南芥配子体和胚胎发育中的功
·Bmi1在肝癌组织及肝癌细胞系HepG2中的表
·肿瘤转移相关蛋白MTA1在化学致癌剂诱发小鼠肝
·高原鼢鼠骨骼肌VEGF基因的特异性研究
·基质金属蛋白酶-3、9在穿通伤白内障大鼠晶状体
·Clusterin和GRP78在胶质瘤中的表达
RNA干涉论文 胚胎细胞论文
·羟基磷灰石纳米粒子携带siRNA-Stat3质
·单核细胞趋化蛋白-1对前列腺癌PC-3M细胞系
·家蚕蚕蛾鳞毛结构蛋白的鉴定
·RNA干涉抑制STAT3基因诱导口腔鳞癌细胞发
·Skp2-siRNA对Eca-109食管癌细胞
·尼罗罗非鱼及斑马鱼胚胎细胞分离培养的研究
·HIV-1 gag基因在人精子基因组中的整合及
·HIV-1 gag基因经卵母细胞垂直传递的实验
·线虫中细胞分泌特性和蛋白质功能的研究
·神经干细胞体外培养体系的建立
   免费论文
公共管理 | 法学 | 理学 | 医药学
政治 | 社会学 | 文学 | 艺术 | 哲学
工学 | 计算机 | 文化 | 英语论文
经济学 | 财政 税收 | 证券金融
管理学 | 会计审计 | 工商管理 | 教育
财务管理 | 论文写作指导 | 应用文
   收费论文
马列毛邓 | 哲学宗教 | 社会科学
政治法律 | 军 事 | 经 济
文化科学教育体育 | 语言文字
文学 | 艺术 | 历史地理 | 自然科学
数理化 | 天文 | 生物科学 | 医药卫生
农业科学 | 工业技术 | 交通运输
航空航天 | 环境安全
   浏览历史

联系论文网 | 收费论文 | 发表论文 | 论文翻译 | 友情链接 | 全部分类 | 网站地图 | 期刊导航
版权所有 2008-2018 论文天下 www.lunwentianxia.com 京ICP备08104503号