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海参精氨酸激酶的折叠与结构研究
中文名称: 海参精氨酸激酶的折叠与结构研究
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论文编号: 3051169收藏本论文】【我的收藏】【我要投稿
英文名称: Studies on the Refolding and Structure of Arginine Kinase from Sea Cucumber Stichopus Japonicus
学位类型: 博士毕业论文
作者: 涉及隐私,隐去***  作者本人请参看权力声明>>
导师: 涉及隐私,隐去***
毕业学校: 涉及隐私,隐去***
专业: 生物学
毕业年份: 涉及隐私,隐去***
关键字: 精氨酸 激酶 精氨酸激酶 化学修饰 定点突变 中间体 再折叠
简介目录: 点击此处 免费索取本论文简介和目录>>
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论文摘要: 本论文对海参肌肉中双亚基精氨酸激酶(AK)的催化机制进行了探讨,并以它为模型,(略)白质的去折叠与再折叠机制. 在海参 AK 的催化机制研究中,对 AK 的邻苯二甲醛(OPTA)修饰证明了在 AK 活性中心附近有一对半胱氨酸(Cys)和赖氨酸(Lys).该 Cys-Lys 位于高度疏水的环境中,可能接近于 ATP 或者 ADP(略)结合部位.磷酸原激酶家族的序列同源性分析暗示这个活性必需的 Cys 很可能就是进化上保守的Cys-274.同时,本论文还运用(略)法,研究了海参 AK 序列中保守的色氨酸在酶分子所起的作用.研究表明 Trp-218 和 Trp-208 都有助于维持 AK 的空间结构,且 Trp-218 是 AK 表现酶活必需的.另一方面,Trp-208 还可能在 AK正确折(略)用. 在以海参 AK 为模型,探讨寡聚蛋白去折叠/再折叠机制时,本论文分别对AK 在热和变性剂条件下的可能去折叠/再折叠途径进行了研究,捕捉平衡态与动力学去折叠/折叠中间体.研究结果显示:AK 的热变性是一(略)折叠过程.AK 在热变性过程中,天然态 AK 活性中心最先被破坏,随之二聚...
Arginine kinase (AK) from sea cucumber was t(omitted)model protein to studythe enzyme catalysis mechanism and unfolding/refolding process of the oligome(omitted). Methods of chemical modification and site-directed mutagenesis were used inthis paper to investigate(omitted)e essenti(omitted)cids. The modification of AK byOPTA indicated an active essential pair of Cys-Lys near or at the active sites of AK.The active essent(omitted)s located in a highly hydrophobic environment,presumably near ATP and ADP...
目录:
第1章 引言第13-36页
  ·精氨酸激酶(AK)第13-22页
    ·精氨酸激酶的研究概况第13-14页
    ·精氨酸激酶的进化第14-16页
    ·精氨酸激酶的催化动力学与热力学研究第16-17页
    ·精氨酸激酶的催化机制与活性中心研究第17-22页
  ·蛋白质化学修饰第22-24页
    ·蛋白质化学修饰概述第22-23页
    ·蛋白质化学修饰的作用第23-24页
  ·蛋白质的去折叠与折叠第24-34页
    ·蛋白质的去折叠研究第24-27页
    ·蛋白质折叠的研究意义第27-28页
    ·蛋白质折叠的理论模型与研究手段第28-29页
    ·蛋白质折叠的能量学第29-31页
    ·蛋白质的部分折叠态与过渡态第31-32页
    ·蛋白质的体内折叠第32-34页
  ·本论文的研究目的和主要内容第34-36页
第2章 海参AK 活性中心附近有一对催化必需的半胱氨酸与赖氨酸第36-52页
  ·前言第36-37页
  ·实验材料与方法第37-41页
    ·实验材料第37页
    ·实验方法第37-41页
  ·实验结果第41-47页
    ·邻苯二甲醛(OPTA)修饰AK 的失活过程第41页
    ·OPTA 修饰AK 的光谱学特征第41-42页
    ·OPTA 修饰AK 的失活动力学第42-43页
    ·化学剂量学分析AK 活性必需的半胱氨酸-赖氨酸对数第43-46页
    ·OPTA 修饰AK 的底物保护第46-47页
    ·OPTA 修饰AK 的物理性质第47页
  ·讨论第47-52页
第3章 海参AK 中色氨酸(Trp)在活性与构象中的作用第52-64页
  ·前言第52-53页
  ·实验材料与方法第53-55页
    ·实验材料第53页
    ·实验方法第53-55页
  ·实验结果第55-61页
    ·Trp 突变体的构建与表达第55-56页
    ·天然AK 与Trp 突变体的酶动力性质比较第56页
    ·天然AK 与Trp 突变体的荧光光谱及荧光焠灭比较第56-58页
    ·天然AK 与Trp 突变体的热稳定性比较第58-59页
    ·天然AK 与Trp 突变体的构象稳定性比较第59-61页
  ·讨论第61-64页
第4章 海参AK 的热失活与热去折叠途径第64-76页
  ·前言第64-65页
  ·实验材料与方法第65-66页
    ·实验材料第65页
    ·实验方法第65-66页
  ·实验结果第66-74页
    ·海参AK 的热失活动力学第66-67页
    ·热变性过程中远紫外CD 变化第67-68页
    ·热变性过程中内源荧光变化第68-69页
    ·热变性过程中活力与构象变化的比较第69-70页
    ·DSC 研究AK 热变性第70页
    ·戊二醛交联与分子筛层析研究AK 热变性第70-72页
    ·AK 热变性过程中的底物保护第72页
    ·Mg~(2+)在AK 热变性中的作用第72-74页
  ·讨论第74-76页
第5章 海参AK 在盐酸胍中的去折叠途径第76-92页
  ·前言第76-77页
  ·实验材料与方法第77-79页
    ·实验材料第77页
    ·实验方法第77-79页
  ·实验结果第79-88页
    ·AK 胍变性过程中酶活力与构象变化第79-81页
    ·酶浓度对AK 胍变性过程的影响第81-82页
    ·分子筛层析监测AK 的胍变性过程第82-83页
    ·戊二醛交联监测AK 的胍变性过程第83页
    ·胍变性AK 的再折叠过程第83-86页
    ·渗压剂对AK 再折叠过程的影响第86-87页
    ·AK 胍变性过程的热力学分析第87-88页
  ·讨论第88-92页
第6章 脲变性海参AK 的再折叠途径——平衡态与动态研究第92-104页
  ·前言第92-93页
  ·实验材料与方法第93-94页
    ·实验材料第93页
    ·实验方法第93-94页
  ·实验结果第94-102页
    ·AK 复性过程中活力与光谱学性质的变化第94-96页
    ·AK 复性过程中分子聚合情况的变化第96-97页
    ·AK 复性过程中形成的可逆聚沉第97-98页
    ·AK 复性的动力学研究第98-100页
    ·AK 复性过程中平衡态中间体与动力学中间体之间的关系第100-102页
  ·讨论第102-104页
第7章 结论第104-107页
参考文献第107-122页
致谢与声明第122-123页
个人简历、在学期间的研究成果及发表的论文第123-124页
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