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猪瘟和口蹄疫病毒抗原基因在植物内的重组与表达
中文名称: 猪瘟和口蹄疫病毒抗原基因在植物内的重组与表达
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论文编号: 3048753收藏本论文】【我的收藏】【我要投稿
英文名称: Classical Swin Fever Virus (CFSV) and Foot-and-mouth Disease Virus (FMDV) Antigen Gene Recombined and Expression in Plant
学位类型: 博士毕业论文
作者: 涉及隐私,隐去***  作者本人请参看权力声明>>
导师: 涉及隐私,隐去***
毕业学校: 涉及隐私,隐去***
专业: 细胞生物学
毕业年份: 涉及隐私,隐去***
关键字: 口蹄疫 口蹄疫病毒 病毒 抗原 基因 植物 重组 猪瘟病毒 VP1 E2 马铃薯 烟草 衣藻 叶绿体转化
简介目录: 点击此处 免费索取本论文简介和目录>>
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论文简介:本文中将口蹄疫病毒抗原基因VP1和黏膜免疫佐剂霍乱毒素B亚基(CTB)融合基因在马铃薯内重组和表达;同时,利用植物叶绿体基因组高效表达的特点,把猪瘟病毒抗原基因E2重组并转化进烟草和衣藻叶绿体基因组中,使其高效表达。为利用植物生物反应器研制口蹄疫和猪瘟基因工程疫苗提供理论和实践依据。   论文的第二部分研究了将口蹄疫病毒抗原基因VP1和霍乱毒素B亚基融合基因通过农杆菌转染的方法转化到马铃薯基因组中,进行重组和表达。通过抗性筛选,得到了具有卡那霉素抗性的转化植株。对马铃薯基因组DNA的PCR扩增、Southernblot、Westernblot和ELISA分析表明,外源基因已经整合进马铃薯基因组,并得到了表达。 论文的第三部分主要研究了烟草叶绿体表达载体PTRE2的构建,并通过基因枪法转化烟草叶绿体基因组,通过壮观霉素抗性筛选,获得了一株转化植株苗。经过两轮抗生素筛选后,分别用CSFV的E2基因及烟草叶绿体同源片段的引物对抗性植株的叶绿体DNA进行PCR扩增和酶切Southernblot分析,结果表明目的基因已经定点整合到烟草叶绿体基因组中。Westernblot和ELISA免疫分析表明,E2基因在烟草叶绿体内得到了表达,表达量占可溶性蛋白的1-2%左右。 论文的第四部分研究了衣藻叶绿体表达载体p64E2的构建,并通过基因枪法转化衣藻叶绿体基因组,通过抗性筛选,获得具有壮观霉素抗性的衣藻转化子。挑取其中两个转化子进行4-5轮同质化筛选后,分别用CSFV的E2基因及烟衣藻叶绿体同源片段的引物对抗性植株的叶绿体DNA进行PCR扩增和酶切Southernblot分析,结果表明目的基因已经定点整合到衣藻叶绿体基因组中。Westernblot和ELISA免疫分析表明,E2基因在烟衣藻叶绿体内得到了表达,表达量占可溶性蛋白的2%左右。
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