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人胎肝来源PACT等重要功能基因的基因打靶研究
中文名称: 人胎肝来源PACT等重要功能基因的基因打靶研究
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论文编号: 3047584收藏本论文】【我的收藏】【我要投稿
英文名称: 无英文名称
学位类型: 博士毕业论文
作者: 涉及隐私,隐去***  作者本人请参看权力声明>>
导师: 涉及隐私,隐去***
毕业学校: 涉及隐私,隐去***
专业: 细胞生物学
毕业年份: 涉及隐私,隐去***
关键字: 来源 基因 基因打靶 PACT HPO CKIP-1 胚胎干细胞 人胎肝
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论文简介:肝脏是人体内多种物质代谢的主要器官,具有重要的生理功能。4-6月孕龄的人胎肝还是造血、免疫系统干祖细胞的主要来源,其中可能存在大量具有重要功能的新基因。本室通过胎肝大规模cDNA测序已经建立了22周孕龄人胎肝基因表达图谱,同时正在进行从胎肝中大规模发掘重要功能新基因的探索,包括PACT、HPO、CKIP-1、NPDC-1、LMBP等。 基因打靶技术是一种通过同源重组按预期方式对靶基因进行定点修饰而改变生物活体遗传信息,进而观察相应基因功能的实验手段。应用此技术,我们共构建成功了上述5种基因的打靶载体,并将打靶载体导入小鼠胚胎干细胞,筛选获得了PACT、HPO、CKIP-13种基因的中靶细胞。各自的基因型均已经过PCR和Southern印迹法鉴定。通过囊胚显微注射技术,我们获得了PACT、IIPO、CKIP-13种基因的嵌合体小鼠。其中IIPO、CKIP-1这2种基因的嵌合体小鼠不能将突变等位基因遗传至子代。而PACT嵌合体小鼠中的突变等位基因可以遗传至子代,获得了可存活、可繁殖、表型正常的PACT杂合体小鼠。将PACT杂合体小鼠自交,在子代中未发现PACT纯合体小鼠。根据野生型与杂合型小鼠数目约1:2的比例,推测其可能在胚胎期纯合致死。 我们对PACT杂合体小鼠自交子代做了大量的胚胎期追踪分析,发现PACT纯合体基因敲除小鼠在胚胎期6.5至7.5天死亡,胚胎发育停滞,原肠形成失败。这揭示了PACT在高等动物早期胚胎发育过程中不可或缺的重要性。通过RT-PCR显示,7.5天的PACT纯合体基因敲除胚胎中,p53的靶基因p21、Mdm2的mRNA水平显著升高。因为PACT在体外实验中可以强烈的抑制p53的转录活性,所以我们推测PACT的缺失可能导致p53转录活性的失控,其下游基因过度表达而导致胚胎期致死效应。目前,更进一步的表型分析和死亡机制研究正在进行中。
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