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肝癌复合表位抗原的免疫原性研究
中文名称: 肝癌复合表位抗原的免疫原性研究
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论文编号: 3045793收藏本论文】【我的收藏】【我要投稿
英文名称: Study on Immunity of Recombinant Multiple Epitopes Antigen of Hepatocellular Carcinoma
学位类型: 博士毕业论文
作者: 涉及隐私,隐去***  作者本人请参看权力声明>>
导师: 涉及隐私,隐去***
毕业学校: 涉及隐私,隐去***
专业: 生物化学与分子生物学
毕业年份: 涉及隐私,隐去***
关键字: 肝癌 复合 表位 抗原 免疫原性 肝细胞癌 T细胞表位 克隆表达 TatPTD DNA免疫
简介目录: 点击此处 免费索取本论文简介和目录>>
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论文简介:肝细胞癌(HCC)是一种严重危害人类健康的恶性肿瘤,我国是世界上肝癌发病率最高的国家之一,因此,开展肝癌的防治研究有重大意义。本研究以肝癌中高表达的AFP和MAGE-1作为模式肿瘤抗原,设计以CTL表位为主体的肝癌多表位复合抗原,以蛋白质和DNA形式,辅于不同的介导策略免疫动物,为进一步开展肝癌免疫治疗奠定基础。 方法:⒈筛选特异性抗原表位,分子设计以合理组装肝癌复合表位基因,克隆表达以获取肝癌复合表位重组蛋白质;⒉构建肝癌复合表位基因的真核表达载体,检测其在哺乳动物细胞的表达;⒊RT-PCR钓取AFP、MAGE-1基因,建立能稳定表达的小鼠细胞系;⒋以多种途径和形式免疫小鼠,在体外以ELISA法检测抗体,ELISPOT法和LDH释放法检测细胞免疫反应;⒌对免疫小鼠进行皮下移植瘤攻击,观察其免疫保护作用。 结果:⒈正确构建复合表位基因的原核表达质粒,目的蛋白质在大肠杆菌中获到高效表达,并得到有效纯化,Tat+T融合蛋白具有体外转导活性;⒉正确构建的复合表位真核表达质粒可在SP2/0细胞中表达;⒊从人肝癌细胞中成功克隆了人AFP、MAGE-1基因,建立了稳定表达的小鼠细胞模型;⒋重组蛋白与重组基因免疫Balb/c小鼠,均可诱导产生抗原特异性的抗体,以T蛋白诱导的体液免疫反应最强;⒌体外T细胞活性检测显示Tat+T蛋白免疫组和pcDNA/T初免疫后以Tat+T蛋白加强免疫组能更有效地激发特异性T细胞免疫;⒍免疫小鼠可以延缓SP2/0-A和SP2/0-M细胞移植瘤的形成、特异性抑制移植瘤生长并能延长小鼠的生存时间。 结论:本研究在肝癌复合表位的分子设计、抗原加工递呈和免疫方案等多方面作了很多新的探索,获得的初步结果表明,所构建的新型复合表位抗原具有很强的免疫原性,特别是在激活特异性CTL反应方面更为突出,为基于CTL表位的肝癌免疫治疗提供了实验依据。
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