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白斑综合症病毒致病相关早期蛋白的鉴定及基因组同源重复区的功能研究
中文名称: 白斑综合症病毒致病相关早期蛋白的鉴定及基因组同源重复区的功能研究
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论文编号: 2911247收藏本论文】【我的收藏】【我要投稿
英文名称: Identification of Pathogeny Related Early Proteins of White Spot Syndrome Virus and Functional Research of the Homologous Repeat Regions Within the Genome
学位类型: 博士毕业论文
作者: 涉及隐私,隐去***  作者本人请参看权力声明>>
导师: 涉及隐私,隐去***
毕业学校: 涉及隐私,隐去***
专业: 药学
毕业年份: 涉及隐私,隐去***
关键字: 病毒 蛋白 基因组 对虾白斑综合症病毒 胶原蛋白 胸腺嘧啶核苷酸合成酶 DNA结合蛋白 功能基因 克隆表达
简介目录: 点击此处 免费索取本论文简介和目录>>
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论文摘要: 对虾白斑综合症病毒(White Spot Syndromic Virus, WSSV),又称为白斑杆状病毒(White Spo(略)lliform Virus, WSBV),是严重危害对虾养殖业的主要病原之一.本论文从WSSV宿主广泛性出发,围绕着病毒致病关键蛋白,特别(略)白,以及病毒蛋白与宿主蛋白间的相互作用机制,从结构功能基因组学和蛋白质组学角度对该病毒快速致死性的原因和机制进行了深入的研究. 本文内容主要包括下列工作:⒈以卤虫(Artemia franciscana)为实验对象简单阐述了其在WSSV宿主链中的作用;⒉在WSS(略)起关键作用的病毒早期蛋白,如:病毒类胶原蛋白(Collagen-like Protein,CLP)和(略)酸合成酶(Thymidylate Synthase,TS)的结构功能作了深入的研究;⒊通过病毒基因组(略)异性结合蛋白的纯化鉴定,对病毒早期基因表达产物与宿主蛋白间的相互作用和在病毒感染和复制过程的作用做了初步的分析. 实验结果显示:□卤虫是一种acute host和latent...
Shrimp (omitted) Syndrome Virus (WSSV), which has also deen referred to as White Spot Bacilliform Virus (WSBV), is a major pathogen of cultivated shrimp but its (omitted) includes a large number of crustaceans. This paper is concerned on (omitted)le pathogen related gene, expecially on the viral early gene products and DNA-specific binding proteins, for studying the infectio(omitted)m of WSSV on functional proteomics level. In this thesis, three main(omitted) included. ⒈ Using Anemia franciscana a...
目录:
摘要第8-12页
前言第12-19页
第1章 卤虫在对虾白斑综合症病毒传播感染中的作用第19-29页
  概述第20-21页
  ·前言第21-23页
    ·对虾白斑综合症病毒的宿主广泛性概述第21-22页
    ·卤虫感染白斑综合症病毒研究的目的和意义第22-23页
  ·材料与方法第23-25页
    ·材料第23页
    ·方法第23-25页
      ·卤虫的饲养第23-24页
      ·卤虫的人工感染第24-25页
      ·白斑综合症病毒的检测第25页
  ·结果与讨论第25-29页
    ·卤虫投喂病毒感染死亡率统计第25-27页
    ·白斑综合症病毒在卤虫中的横向和纵向传播第27-29页
第2章 对虾白斑综合症病毒胶原蛋白的鉴定第29-56页
  概述第30-31页
  ·前言第31-38页
    ·胶原蛋白概述第31-35页
      ·胶原蛋白的种类第32-34页
      ·胶原蛋白的结构和生物学功能特点第34-35页
    ·类胶原蛋白第35-36页
      ·类胶原蛋白定义第35页
      ·类胶原蛋白在结构和功能上与胶原蛋白的差别第35-36页
    ·类胶原片段第36页
      ·类胶原片段定义第36页
      ·类胶原片段的功能及存在范围第36页
    ·病毒膜蛋白第36-38页
      ·结构性质和主要功能域第37-38页
      ·病毒膜蛋白与某些胶原蛋白在结构上的相似性第38页
  ·材料与方法第38-43页
    ·材料第38-39页
    ·引物第39页
    ·方法第39-43页
      ·螯虾感染第39页
      ·感染螯虾总mRNA的提取第39页
      ·感染螯虾总RNA的提取第39页
      ·白斑综合症病毒类胶原蛋白结构的计算机辅助分析第39-40页
      ·RT-PCR第40页
      ·Northern blot第40页
      ·类胶原蛋白基因在大肠杆菌(E.coli.)中的克隆表达第40页
      ·核衣壳病毒和有包膜病毒的纯化分离第40页
      ·抗体IgG制备第40-41页
      ·Western blot第41页
      ·特异抗体制备及免疫定位技术第41-42页
      ·免疫亲和层析柱纯化天然病毒类胶原蛋白第42-43页
      ·病毒类胶原蛋白糖基化特点分析第43页
  ·结果与讨论第43-56页
    ·白斑综合症病毒类胶原蛋白一级结构分析第43-46页
    ·白斑综合症病毒类胶原蛋白基因转录水平分析第46-49页
    ·白斑综合症病毒类胶原蛋白N末端肽的表达纯化第49-52页
    ·抗体制备第52页
    ·白斑综合症病毒类胶原蛋白的免疫定位第52-53页
    ·天然病毒CLP蛋白的免疫亲和纯化和糖基化分析第53-56页
第3章 对虾白斑综合症病毒中胸腺嘧啶核苷酸合成酶的鉴定第56-73页
  概述第57-58页
  ·前言第58-63页
    ·胸腺嘧啶核苷酸合成酶概述第58-63页
      ·胸腺嘧啶核苷酸合成酶的生物学功能第59-60页
      ·胸腺嘧啶核苷酸合成酶在抗肿瘤研究中的应用第60-61页
      ·胸腺嘧啶核苷酸合成酶的主要功能域第61-63页
    ·胸腺嘧啶核苷酸合成酶研究现状及展望第63页
  ·材料与方法第63-65页
    ·材料第63-64页
    ·引物第64页
    ·方法第64-65页
      ·计算机辅助分析第64页
      ·RT-PCR第64页
      ·'/3′-RACE第64页
      ·白斑综合症病毒胸腺嘧啶核苷酸合成酶的克隆表达第64页
      ·5 TS底物结合性质的鉴定第64-65页
  ·结果与讨论第65-73页
    ·白斑综合症病毒胸腺嘧啶核苷酸合成酶的一级结构第65-66页
    ·白斑综合症病毒胸腺嘧啶核苷酸合成酶进化树分析第66-69页
    ·白斑综合症病毒胸腺嘧啶核苷酸合成酶基因转录水平分析第69-70页
    ·白斑综合症病毒胸腺嘧啶核苷酸合成酶底物结合实验第70-73页
第4章 病毒同源重复区特异DNA结合蛋白的纯化鉴定第73-95页
  概述第74-76页
  ·前言第76-83页
    ·白斑综合症病毒基因组内多拷贝重复片段第76-78页
      ·基因组DNA序列重复性特征第76页
      ·白斑综合症病毒中重复序列特征第76-78页
    ·DNA结合蛋白第78-79页
    ·特异性DNA结合蛋白的纯化第79-83页
      ·经典亲和层析法第79-81页
      ·改进的亲和层析纯化技术第81-82页
      ·凝胶迁移率分析第82-83页
  ·材料与方法第83-86页
    ·引物第83页
    ·溶液配制第83-84页
    ·方法第84-86页
      ·探针灵敏度检测第84页
      ·蛋白探针结合反应第84页
      ·分子筛CM-sepharose 6B分离纯化酶切产物小片段第84-85页
      ·蛋白粗提物(Crude Extracts)样品的制备第85页
      ·亲和层析法纯化特异DNA结合蛋白第85-86页
      ·结合蛋白凝胶迁移率分析第86页
  ·结果与讨论第86-95页
    ·病毒基因组重复序列计算机辅助分析第86-87页
    ·亲和层析配体的制备第87-88页
      ·含HCD-158片段的克隆第87-88页
      ·分子筛纯化亲和配体第88页
    ·亲和层析蛋白样品的选择第88-89页
    ·亲和层析纯化特异DNA结合蛋白第89-91页
    ·凝胶阻滞反应鉴定纯化的特异性DNA结合蛋白第91-94页
      ·GMSA分析第91-92页
      ·健康虾与感染虾亲和纯化洗脱产物比较第92-93页
      ·特异性结合位点的确定第93-94页
    ·肽指纹图谱分析第94-95页
全文结论与展望第95-97页
参考文献第97-107页
附录第107-117页
  附录1. 常规实验方法第107-113页
  附录2. 常规试剂和溶液第113-117页
博士在学期间发表与待发表文章第117-118页
致谢第118页
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