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斑马鱼Dmrt1和Dmrt5基因克隆和表达分析
中文名称: 斑马鱼Dmrt1和Dmrt5基因克隆和表达分析
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论文编号: 2877014收藏本论文】【我的收藏】【我要投稿
英文名称: Molecular Cloning and Expression of Dmrt1 and Dmrt5 Genes of Zebrafish
学位类型: 博士毕业论文
作者: 涉及隐私,隐去***  作者本人请参看权力声明>>
导师: 涉及隐私,隐去***
毕业学校: 涉及隐私,隐去***
专业: 遗传学
毕业年份: 涉及隐私,隐去***
关键字: 斑马鱼 基因克隆 DM基因 基因表达 选择性剪接 氨基酸 编码
简介目录: 点击此处 免费索取本论文简介和目录>>
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论文简介:我们利用DM基因简并引物PCR技术,克隆了五个新的Dmrt基因片段,包括Dmrt1、Dmrt2b、Dmrt3、Dmrt4和Dmrt5.Dmrt1、Dmrt2a和Dmrt3形成一个基因簇,位于5号连锁群(LG5)上.这种保守的同线连锁关系同样存在于人类、小鼠、大鼠、河豚和青鳉中.斑马鱼的Dmrt基因有待进一步克隆和分析.基于DNA序列信息,我们设计了克隆Dmrt1基因全长的引物,以SMART引物合成的cDNAs为模板,结合DM区引物进行5'RACE和3'RACE,在DM区重叠的5'RACE和3'RACE片段测序后,在此序列信息的基础上,扩增得到Dmrt1基因的全长cDNA.有趣的是,最终我们共获得三种在3'端区域发生选择性剪接的转录本.Dmrt1 a1,全长1380bp,编码一个氨基酸长度为267的预测的蛋白质.Dmrt1 b,在710nt处具有一段不同长度的重复单位CA,因此造成开放阅读框的移码,现已发现,Dmrt1 b1编码242个氨基酸而Dmrt1 b2编码254个氨基酸的可能的蛋白质.Dmrt1 c1,全长975bp,编码一个长仅132氨基酸的潜在的蛋白.为了获取更多的Dmrt1的基因组信息,我们搜索了Sanger研究院的斑马鱼基因组数据库,发现了编码Dmrt1基因的Contig,与mRNA序列比较后,共发现了7个不同的外显子,其选择性剪接造成Dmrt1的异构体.成体组织的RT-PCR分析表明,Dmrt5基因在脑、精巢和卵巢中表达,但在肌肉、肝脏和小肠中没有检测到表达.实时荧光定量PCR的结果表明,Dmrt5基因在精巢中表达较卵巢的强.人Dmrt5基因的表达模式与斑马鱼的不同,人类Dmrt5基因只在成体睾丸中表达.虽然小鼠成体组织表达模式未有报道,但在14.5dpc胚胎中,脑、精巢和卵巢中均有很强的表达信号,其它一些组织中也有少量的表达.斑马鱼性腺组织切片原位杂交结果表明,在精巢中,Dmrt5基因主要在精原细胞、精母细胞和精子细胞中表达;而在卵巢中,表达集中在发育中的卵母细胞中.
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