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骨纤维结构不良病变组织雌激素受体和增殖细胞核抗原检测及临床意义
作者:  时间:2007/11/22 11:27:00  来源:论文天下论文网

           作者:牛彦辉,王臻,郑修存,吴作栋,沈强,张立明

【关键词】  ,,纤维发育不良

    Detection and significance of estrogen receptor and proliferating cell nuclear antigen in tissues of fibrous dysplasia of bone

  【Abstract】  AIM:  To investigate the relation between the clinical biological behavior and the expression of estrogen receptor (ER) and proliferating cell nuclear antigen (PCNA) in the tissues of fibrous dysplasia of bone (FDB). METHODS:  Ninetyeight cases wrer  surgically treated,  pathologically confirmed as having fibrous dysplasia and  followed up. The primary operation specimens were randomly selected and divided into recurrence group (n=24) and cured group (n=24), children group (n=26) and adult group(n=22). The ER and PCNA in the specimens were detected with monoclonal antibody to ER or PCNA by immunohistochemistry. RESULTS:  The general positive expression rate of ER was 56.25%(27/48). The positivity rate in recurrence group was higher than that in cured group (70.83% vs 41.67%, P<0.05) and the positivity rate in children group was higher than that in adult group (69.23% vs 40.91%, P<0.05). The expression of PCNA in recurrence group was higher than that in cured group (P<0.01). The expression of PCNA had a tendency to be higher in children group than that in adult group, but with no statistical significance (P>0.05). CONCLUSION:  FDB is relative to the estrogen. The abnormal expression of ER, the disturbance of the regulation of estrogen in bone development and metabolism may be the causes of the onset and recurrence of FDB. The expression of PCNA is related with the recurrence of FDB. PCNA can be used as a reference marker for prognosis of FDB.

  【Keywords】 fibrous dysplasia of bone; receptors estrogen;     proliferating cell nuclear antigen(PCNA);  immunohistochemistry

  【摘要】 目的: 探讨骨纤维结构不良(FDB)病变组织雌激素受体(ER)和增殖细胞核抗原(PCNA)的表达并讨论其临床意义. 方法:  98例FDB患者手术治疗、病理确诊并获随访. 收集初次手术切除的标本,随机从治愈和复发病例中各抽取24例. 对复发组(n=24)与治愈组(n=24)、小儿组(n=26)与成人组(n=22)进行对比,用单克隆抗体免疫组织化学方法对病变组织进行ER和PCNA检测. 结果: ER总阳性率为56.25%(27/48). 复发组70.83%(17/24)明显高于治愈组41.67%(10/24) (P<0.05). 小儿组69.23%(18/26)明显高于成人组40.91%(9/22, P<0.05). 复发组PCNA阳性表达强度显著高于治愈组(P<0.01),而小儿组PCNA阳性表达高于成人组,但无统计学差异(P>0.05). 结论: FDB的雌激素相关性表现为ER异常表达而导致骨发育及代谢调节紊乱;PCNA阳性表达强度与骨纤维结构不良的复发密切相关,可作为其预后估测的参考指标.

  【关键词】  纤维发育不良,骨;受体,雌激素;增殖细胞核抗原;免疫组织化学

  0引言

  骨纤维结构不良(fibrous dysplasia of bone, FDB)的发病率居骨与关节瘤样病变的首位[1],其临床表现为,术后复发率高,儿童期更具高度复发倾向和侵袭性,部分病灶呈进展性,部分病灶却长期静止,有些病例反复多次复发,少数可发生恶变,但泛发性骨纤维结构不良(Albright综合征)主要见于女性. 我们检测骨纤病变组织中雌激素受(estrogen receptor, ER)和增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen, PCNA)的变化并讨论其临床意义.

  1材料和方法

  1.1材料

  标本来源于197701/199806西京医院骨科手术治疗的骨纤患者病变组织石蜡埋块. 选取其中有随访结果的98例患者初次手术标本,根据随访结果分成复发与治愈两组. 采用随机数字法各选取24个标本,共48例. 再根据患者年龄分为:小儿组(≤14岁)26例,成人组(≥15岁)22例. 一抗分别选用法国Immunotech公司产的鼠抗人ER mAb(1∶50)和丹麦DAKO公司产的鼠抗人PCNA mAb(1∶40). 二抗均选用Sigma公司产的生物素标记羊抗鼠IgG. SABC试剂盒(武汉博士德生物工程有限公司).

  1.2方法

  标本连续切片3张,1张HE染色,病理医师再次确诊,2张分别进行ER和PCNA检测. 检测采用免疫组织化学染色法(SABC法). 步骤: 切片脱蜡至水;6 mL/L H2O2封闭内源性过氧化物酶,抗原修复10 min; 20 mL/L羊血清封闭20 min;加一抗4℃冰箱过夜;37℃水浴箱孵育1 h;滴加二抗37℃ 20 min. 以上三步间均用PBS缓冲液振洗5 min×3次;新配DAB显色液显色;苏木素衬染,乙醇脱水,透明,封片. ER染色选用ER阳性乳腺癌组织切片为阳性对照,PCNA染色选用PCNA阳性扁桃体增生组织切片为阳性对照. 均以PBS缓冲液代替一抗做阴性对照.

  用Olympus1双目显微镜观察细胞. ER染色: 胞质和胞核内可见棕黄色颗粒者为阳性细胞. 每片随机观察10个高倍视野,平均阳性细胞数>5%定为ER阳性. PCNA染色: 细胞核内显示棕黄色颗粒者为阳性细胞. 随机观察5个高倍视野,每视野计数100个细胞中的阳性细胞数,求均数. 采用半定量法,其阳性表达强度为,±: <5%; +: 5%~15%; : 15%~30%; : >30%.
 
  统计学处理: ER阳性率组间比较采用χ2检验,PCNA阳性表达强度组间比较采用Wilcoxon等级秩和检验.

  2结果
 
  2.1ER和PCNA阳性表达时细胞中的定位及组织中阳性细胞分布规律ER阳性表达时,阳性细胞胞质及胞核中均可见棕黄色阳性颗粒,分布均匀(Fig 1). 骨小梁周围的骨母细胞及胞体较宽大的纤维样细胞表达强(Fig 2),瘦长的纤维样细胞表达较弱. PCNA阳性表达时,仅胞核内可见棕黄色阳性颗粒,分布不均,阳性胞核着色深浅不一. 骨母细胞及胞体较宽大的纤维样细胞多呈阳性,瘦长的纤维样细胞多为阴性(Fig 3). 组织中阳性细胞分布不均,纤维样细胞宽大的部位阳性表达强,细胞瘦长的部位阳性表达弱(Fig 4)



.

  2.2ER阳性表达结果48例中ER阳性率为56.25%(27/48). 复发组阳性表达率70.83%(17/24)明显高于治愈组41.67%(10/24, P<0.05),而小儿组阳性表达率69.23%(18/26)明显高于成人组40.91%(9/22, P<0.05, Tab 1).

  2.3PCNA阳性表达结果复发组PCNA阳性表达强度明显高于治愈组(P<0.01),而小儿组阳性表达高于成人组(P>0.05, Tab 2).  表2各组PCNA阳性表达结果(略)

  3讨论
 
  FDB是一种以骨纤维变性为特征的类肿瘤疾患,约占类肿瘤疾病的7%[2]. 疾病复发时,多以纤维组织增生为主,多为胞体及胞核较宽大的细胞,排列较致密,骨小梁数量少,短小或细长. 疾病治愈时纤维样细胞多细长,纤维组织排列较疏松,骨小梁相对粗大,数量也较多,甚至部分可连接成网. 免疫组化染色也显示:标本中宽大的纤维样细胞ER和PCNA的阳性表达较强,而以细长纤维样细胞为主的标本中阳性表达较弱,甚至无阳性表达. 提示骨纤病变组织的形态学特征及ER和PCNA的阳性表达强度与其临床生物学行为密切相关. 纤维组织增生明显,ER及PCNA阳性表达强的病例,临床上易复发.

  ER是一种存在于某些组织细胞胞质和胞核中的蛋白质[3]. 雌激素通过骨组织中的ER发挥其调节作用[4]. FDB复发患者和小儿ER阳性率均明显高于治愈患者和成人(P<0.05),说明ER与骨纤维化密切相关

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